本文關(guān)鍵詞：乙型肝炎病毒基因組的垂直傳遞及其突變與表達(dá)　出處：《中國(guó)海洋大學(xué)》2007年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 基因組 乙型肝炎病毒 乙型肝炎 睪丸 卵巢 乙肝患者 小鼠 垂直傳遞

【摘要】： 乙型肝炎(簡(jiǎn)稱(chēng)乙肝)是乙型肝炎病毒(HBV)感染所致,是一種難治性的嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的常見(jiàn)病與多發(fā)病,是與慢性活動(dòng)性肝炎、慢性遷延性肝炎、肝硬化和原發(fā)性肝細(xì)胞癌發(fā)生關(guān)聯(lián)的疾病。據(jù)統(tǒng)計(jì),世界上約有3億五千萬(wàn)人攜帶HBV,每年新增乙肝患者50萬(wàn)～100萬(wàn),我國(guó)感染人數(shù)約占世界感染人數(shù)的50%。乙肝每年導(dǎo)致至少200萬(wàn)人死亡。然而,迄今乙肝尚無(wú)特異有效的臨床治療對(duì)策與措施,乙肝的發(fā)生率尚未顯著降低。因此,HBV感染的傳播方式受到研究者們的關(guān)注;乙肝經(jīng)生殖細(xì)胞垂直傳播的途徑尚未得到證實(shí),有關(guān)研究報(bào)道甚少。HBV是目前所知的最小的嗜肝病毒。HBV DNA長(zhǎng)約3.2kb,構(gòu)成HBV基因組,為部分雙鏈環(huán)狀病毒。HBV基因組共有4個(gè)開(kāi)放閱讀框架P、C、S和X區(qū)。 本文報(bào)道了HBV基因組在男、女乙肝患者睪丸組織、卵巢組織中的基因復(fù)制、基因表達(dá)和基因突變,HBV基因組在乙肝患者父子、母子間垂直傳遞,HBV基因組小鼠卵細(xì)胞載體的構(gòu)建和精細(xì)胞載體的構(gòu)建與轉(zhuǎn)HBV基因組小鼠的垂直傳遞。本研究從分子遺傳學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)和組織學(xué)等方面為HBV基因組經(jīng)精細(xì)胞和卵細(xì)胞垂直傳遞提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù);乙肝患者的研究和動(dòng)物實(shí)驗(yàn)證明,受到HBV感染的乙肝患者的生殖細(xì)胞能夠把HBV基因組傳遞給其發(fā)病后出生子女。本文為乙肝垂直傳播的理論提供了證據(jù),為HBV感染的干預(yù)(如乙肝疫苗的應(yīng)用等)提供了理論基礎(chǔ)和依據(jù)。乙型肝炎患者父親發(fā)病后出生子女 本文首先研究分析了較大家系、樣本的乙型肝炎患者父親(HBF)、乙型肝炎患者父親發(fā)病后出生子女(HBFa)和乙型肝炎患者父親發(fā)病前出生子女(HBFb)各實(shí)驗(yàn)組血清游離型、外周血單核細(xì)胞(PBMC)整合型HBV基因組檢測(cè)率和HBV感染率,發(fā)現(xiàn)HBF、HBFa組的3項(xiàng)指標(biāo)顯著高于HBFb組,HBF與HBFa組的3項(xiàng)指標(biāo)呈一致性增高。說(shuō)明HBFa組的HBV基因組有可能從HBF組獲得。進(jìn)一步分析了整合在HBF與HBFa基因組內(nèi)的HBV基因組突變,發(fā)現(xiàn)HBF與HBFa父子之間具有完全一致的聚合酶鏈反應(yīng)-單鏈構(gòu)象多態(tài)性(PCR-SSCP)單鏈泳動(dòng)變位;所分析的的3個(gè)家系5個(gè)成員的HBF與HBFa的HBV基因組,有U5樣序列區(qū)和非U5樣序列區(qū)的3個(gè)位點(diǎn)的單核苷酸多態(tài)性(SNP)突變位點(diǎn)完全一致,HBF家系2301父子U5樣序列區(qū)和非U5樣序列區(qū)的10個(gè)位點(diǎn)的SNP突變位點(diǎn)完全一致。提示HBFa的所有HBV基因組的SNP都應(yīng)是由整合有HBV基因組的HBF基因組通過(guò)精細(xì)胞傳遞所致。為了在產(chǎn)生精細(xì)胞的睪丸及附睪組織尋找到組織與細(xì)胞學(xué)證據(jù),作者又研究了HBF的睪丸及附睪組織細(xì)胞內(nèi)的HBV基因組,發(fā)現(xiàn)在HBF睪丸及附睪組織中存在大量的HBV基因組,主要分布在曲細(xì)精管的基底部。顯然,為HBV基因組在父子之間的垂直傳遞提供了組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)的證據(jù)。本文關(guān)于HBV基因組父子間垂直傳遞的研究為首次報(bào)道。 第二,首次大樣本的研究了乙肝表面抗原(HBsAg)、乙肝e抗原(HBeAg)均陽(yáng)性乙肝患者母親(HBM)孕婦的卵巢組織樣本HBV基因組基因的表達(dá),檢測(cè)HBsAg在卵巢組織的分布與表達(dá),發(fā)現(xiàn)HBsAg主要分布在卵巢組織的血管管壁及周?chē)拈g質(zhì)細(xì)胞內(nèi),在卵巢皮質(zhì)的卵泡細(xì)胞胞質(zhì)中檢測(cè)到HBsAg。說(shuō)明在卵巢組織和卵泡細(xì)胞內(nèi)存有HBV基因組,卵巢組織和卵泡細(xì)胞受到了HBV的感染。為母嬰之間HBV基因組通過(guò)卵細(xì)胞的垂直傳遞提供了組織學(xué)與細(xì)胞學(xué)的證據(jù)。進(jìn)一步分析了HBM卵巢組織與外周血、HBM新生兒臍帶血存在的HBV基因組。發(fā)現(xiàn)在HBM卵泡組織中檢測(cè)到HBV基因組,其檢測(cè)率與HBM新生兒臍帶血中HBV基因組的檢測(cè)率呈一致性增高,顯著高于對(duì)照組。說(shuō)明HBM新生兒細(xì)胞內(nèi)的HBV基因組可能是來(lái)自HBM,是通過(guò)卵細(xì)胞傳遞而來(lái)。因?yàn)镠BM孕婦的卵巢組織樣本HBV基因組的免疫組化研究結(jié)果已提供了組織學(xué)與細(xì)胞學(xué)的基礎(chǔ)。同時(shí),本文進(jìn)一步研究了HBM卵巢石蠟組織切片組織細(xì)胞內(nèi)的HBV基因組與分布,發(fā)現(xiàn)在HBM卵巢組織中檢測(cè)到HBV基因組,分別分布在卵巢皮質(zhì)的卵泡細(xì)胞,髓質(zhì)的血管管壁以及血管周?chē)g質(zhì)細(xì)胞中。說(shuō)明HBV感染了卵巢組織,在卵巢組織和卵泡細(xì)胞中存在HBV基因組。又進(jìn)一步為母嬰間通過(guò)卵細(xì)胞垂直傳遞HBV基因組提供了組織學(xué)和細(xì)胞學(xué)的證據(jù)。本文關(guān)于HBV基因組母子間垂直傳遞的研究為首次報(bào)道。 第三,應(yīng)用人的生殖細(xì)胞進(jìn)一步研究HBV基因組的垂直傳遞,涉及倫理學(xué)的問(wèn)題,顯然是不可能的。我們應(yīng)用陽(yáng)離子脂質(zhì)體-質(zhì)粒pBR322-HBV DNA共轉(zhuǎn)染小鼠卵細(xì)胞,證明HBV基因組可以通過(guò)脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染進(jìn)入小鼠卵細(xì)胞,卵細(xì)胞可以作為HBV基因組的載體;為培育證明HBV基因組可以經(jīng)卵細(xì)胞垂直傳遞子代的動(dòng)物模型提供了前提條件。 第四,運(yùn)用精子載體共培養(yǎng)和體內(nèi)轉(zhuǎn)染法共轉(zhuǎn)染小鼠精細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)小鼠精子有一定俘獲外源HBV基因組的能力,并發(fā)現(xiàn)HBV基因組在小鼠精細(xì)胞的分布。作者應(yīng)用精子載體法建立了HBV基因組經(jīng)精細(xì)胞垂直傳播的轉(zhuǎn)HBV基因組小鼠模型。為HBV基因組經(jīng)生殖細(xì)胞垂直傳遞提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。為HBV感染的垂直傳播提供了實(shí)驗(yàn)證據(jù)。 HBV基因組垂直傳遞的研究有助于探討、闡明HBV感染傳播的機(jī)制與途徑。除在乙肝傳播的理論上有所突破之外,還將為HBV感染的臨床預(yù)防提供理論依據(jù)和基礎(chǔ);這在降低乙肝發(fā)生率、提高人口素質(zhì)、優(yōu)生優(yōu)育等方面都有重要的臨床意義。
[Abstract]:Hepatitis B virus ( HBV ) infection is caused by hepatitis B virus ( HBV ) infection . It is a kind of common disease and disease which is refractory to human health . It is related to chronic active hepatitis , chronic persistent hepatitis , liver cirrhosis and primary hepatocellular carcinoma . In this paper , the gene duplication , gene expression and gene mutation of HBV genome in male and female hepatitis B patients , the gene expression and gene mutation , the construction of HBV genome in HBV genome and the vertical transfer of sperm cell carrier in HBV genome mice were provided . In order to find tissue and cytology evidence in HBV genome of HBF and HBFa , the HBV genome of HBF and HBFa was significantly higher than that of HBF and HBFa . In this paper , the expression of HBV genome in the ovarian tissue samples of HBM pregnant women was studied . The HBV genome was detected in the ovarian tissue and the peripheral stromal cells . The results showed that the HBV genome was detected in the ovarian tissue and the peripheral stromal cells . Thirdly , it is not possible to further study the vertical transfer of HBV genome by using human reproductive cells . It is clear that the HBV genome can be transfected into mouse egg cells by liposome transfection , and it is proved that HBV genome can be transfected into mouse egg cells by liposome transfection , and the egg cells can be used as carriers of HBV genome . Fourthly , the mouse sperm cells were co - transfected with sperm vector co - culture and in vivo transfection method . It was found that the sperm of mice had the ability to capture exogenous HBV genome , and the distribution of HBV genome in mouse sperm cells was found . In addition to the breakthrough in the theory of hepatitis B transmission , it will provide theoretical basis and basis for the clinical prevention of HBV infection , which has important clinical significance in reducing the incidence of hepatitis B , improving the quality of population and eugenics .

【學(xué)位授予單位】：中國(guó)海洋大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類(lèi)號(hào)】：R373.2

【引證文獻(xiàn)】

相關(guān)博士學(xué)位論文 前1條

1 呂志良;新型2-吡啶酮類(lèi)衍生物的設(shè)計(jì)、合成及抗乙型肝炎病毒活性研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2011年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 李茜;pcDNA3.1-preS1-GFP重組質(zhì)粒的構(gòu)建及其在小鼠精子內(nèi)的表達(dá)[D];青島大學(xué);2010年

，

本文編號(hào)：1374952