本文關(guān)鍵詞：免疫磁珠分離人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《東南大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： 骨髓基質(zhì)干細(xì)胞 成人骨髓 免疫磁珠 Stro-1 分離純化

【摘要】： 目的利用免疫磁珠快速分離、純化同質(zhì)性成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。 方法采集正常成人骨髓,經(jīng)淋巴細(xì)胞分離液分離出骨髓單個(gè)核細(xì)胞(MNCs)并培養(yǎng)擴(kuò)增,應(yīng)用免疫磁珠從MNCs中分離出Stro-1~+細(xì)胞,對(duì)其進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生物學(xué)特性方面的測(cè)定與分析,并與傳統(tǒng)貼壁培養(yǎng)法獲得的BMSCs相比較。通過流式細(xì)胞儀檢測(cè)Stro-1~+細(xì)胞表面標(biāo)記及細(xì)胞周期分布;通過相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài);通過繪制細(xì)胞貼壁率曲線、生長曲線、體外擴(kuò)增曲線了解其體外生長情況及擴(kuò)增能力;通過誘導(dǎo)成骨后堿性磷酸酶染色、Von Kossa染色及X線衍射分析了解其成骨能力。 結(jié)果利用免疫磁珠可從成人骨髓中獲取骨髓基質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)。與貼壁法獲得的BMSCs相比較,獲得的細(xì)胞克隆單一,幾乎無圓形細(xì)胞夾雜,貼壁率高,生長狀況良好,體外擴(kuò)增可達(dá)10~6～10~7數(shù)量級(jí)。免疫磁珠分離法對(duì)BMSCs細(xì)胞周期無明顯影響,其分離所得的BMSCs在成骨誘導(dǎo)培養(yǎng)條件下具有良好的成骨分化能力。 結(jié)論利用免疫磁珠可以得到純度高、活性好的成人骨髓基質(zhì)干細(xì)胞。
[Abstract]:Objective to isolate and purify homogenous adult bone marrow stromal stem cells by immunomagnetic beads. Methods normal adult bone marrow was collected, bone marrow mononuclear cells (MNCs) were isolated from lymphocytes and cultured and amplified. Stro-1 cells were isolated from MNCs by immunomagnetic beads. The morphologic and biological characteristics were determined and analyzed. Compared with the BMSCs obtained by traditional adherent culture method, the surface markers and cell cycle distribution of Stro-1 ~ ~ cells were detected by flow cytometry. Cell morphology was observed by phase contrast microscope. Through drawing cell adhesion rate curve, growth curve, in vitro amplification curve to understand its in vitro growth and amplification ability; The osteogenic ability was studied by means of Von Kossa staining and X-ray diffraction analysis. Results BMSCs could be obtained from adult bone marrow by immunomagnetic beads. Compared with BMSCs obtained by adherent method, the obtained cell clones were single and almost no round cell inclusion. The adherent rate was high and the growth condition was good. In vitro amplification could reach 10 ~ (6) ~ 10 ~ (7) orders of magnitude. The immunomagnetic bead separation method had no obvious effect on the BMSCs cell cycle. The isolated BMSCs has good osteogenic differentiation ability in osteogenic culture. Conclusion High purity and high activity adult bone marrow stromal stem cells can be obtained by using immunomagnetic beads.
【學(xué)位授予單位】：東南大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R329

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