發(fā)布時間：2018-01-02 01:32

  本文關(guān)鍵詞：臍血單個核細(xì)胞體外誘導(dǎo)為肝樣細(xì)胞的研究　出處：《福建醫(yī)科大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： [背景]隨著胚層限制理論的打破，成體干細(xì)胞的可塑性已成為近年來的研究熱點(diǎn)。臍血干細(xì)胞以其干細(xì)胞含量高、來源豐富、采集簡單、比較純凈等特點(diǎn)可能成為包括肝細(xì)胞在內(nèi)的多種細(xì)胞的較好來源。 [目的]探討在細(xì)胞外基質(zhì)人血漿纖維連接蛋白的存在下，用成纖維細(xì)胞因子4(FGF—4)和肝細(xì)胞生長因子(HGF)聯(lián)合誘導(dǎo)人臍血單個核細(xì)胞向肝樣細(xì)胞分化的可行性。 [方法]采集足月健康產(chǎn)婦臍帶血至含CPDA抗凝劑的無菌采血袋中，用等體積3％明膠沉淀紅細(xì)胞后采用密度梯度離心法分離單個核細(xì)胞，利用貼壁時間的差異去除成熟貼壁細(xì)胞，然后接種于DMEM低糖培養(yǎng)基，在用人血漿纖維連接蛋白包被過的培養(yǎng)板中進(jìn)行貼壁培養(yǎng)。分為誘導(dǎo)組和未誘導(dǎo)組兩組，誘導(dǎo)組添加細(xì)胞因子HGF和FGF-4。在培養(yǎng)的第0、7、14、21、28天，分別以RT-PCR和免疫細(xì)胞化學(xué)染色方法檢測分析甲胎蛋白(AFP)、白蛋白(ALB)、角蛋白18(CK-18)在轉(zhuǎn)錄和翻譯水平的表達(dá)情況。并用糖原染色(PAS)方法檢測誘導(dǎo)后細(xì)胞是否具有正常成熟肝細(xì)胞合成糖原的功能。 [結(jié)果](1)倒置顯微鏡下觀察到的形態(tài)變化：誘導(dǎo)后細(xì)胞體積逐漸變大，形狀由圓形逐漸變?yōu)闄E圓形、不規(guī)則圓形、多邊形等，，部分具有雙核多核呈現(xiàn)出典型的肝樣細(xì)胞的形態(tài)特點(diǎn)。在細(xì)胞密度較高的區(qū)域有多個細(xì)胞聚集在一起的融合現(xiàn)象，這些高密度區(qū)域的細(xì)胞形態(tài)變化較低密度區(qū)更為明顯。(2)免疫細(xì)胞化學(xué)染色結(jié)果：誘導(dǎo)后第7、14、21、28天ALB和CK-18染色均為陽性著色；AFP染色在誘導(dǎo)第7、14天呈陽性著色，第21天陽性著色細(xì)胞減少，到28天基本變?yōu)殛幮�。在未誘導(dǎo)組這些指標(biāo)均未見表達(dá)。(3)PAS染色結(jié)果：在第21天呈現(xiàn)弱陽性著色，到第28天顯示強(qiáng)陽性著色。無細(xì)胞因子組染色呈陰性。(4)RT-PCR結(jié)果：在誘導(dǎo)后7、14、21天未成熟肝細(xì)胞具有的表型AFP在轉(zhuǎn)錄水平有表達(dá)，到28天后即呈陰性表達(dá)。成熟肝細(xì)胞表型ALB和CK-18于誘導(dǎo)的第7天在轉(zhuǎn)錄水平就開始表達(dá)，于誘導(dǎo)的第14天就有明顯表達(dá)并一直持續(xù)到檢測的第28天。 [結(jié)論]聯(lián)合應(yīng)用HGF和FGF-4可誘導(dǎo)臍血單個核細(xì)胞向肝細(xì)胞表型和功能的細(xì)胞分化。這種培養(yǎng)體系可能為用細(xì)胞移植療法治療損傷性疾病提供肝細(xì)胞。
[Abstract]:In recent years , the plasticity of adult stem cells has become a hot spot in recent years . The umbilical cord blood stem cells can be a good source of many kinds of cells , including liver cells , with the characteristics of high content of stem cells , abundant source , simple collection , and purity . Objective : To investigate the feasibility of using fibroblast growth factor 4 ( FGF - 4 ) and hepatocyte growth factor ( HGF ) to induce the differentiation of human umbilical cord blood mononuclear cells into liver - like cells in the presence of fibronectin . Methods : Human umbilical cord blood was collected in a sterile blood bag containing CPDA anticoagulant . After precipitating red blood cells with equal volume of 3 % gelatin , the cells were isolated by density gradient centrifugation , and then cultured in DMEM low - sugar medium . The expression of AFP , ALB and CK - 18 were detected by RT - PCR and immunohistochemical staining . Positive staining was observed on 7th , 14th , 21st , 28th , 28th and 28th day after induction . ( 3 ) Positive staining was observed on 7th , 14th , 21st , 28th and 28th days after induction . Conclusion : HGF and FGF - 4 can induce differentiation of human umbilical cord blood mononuclear cells to hepatocytes phenotype and function .

【學(xué)位授予單位】：福建醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號】：R329.2

【參考文獻(xiàn)】

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1 夏茂林;肝糖原和肌糖原[J];生物學(xué)教學(xué);1997年07期

2 李文晰,段芳齡,馬軍,朱武凌,高天慧,陳香宇,顏伏歸,李蔚,韓娜,王曉,孫艷,孫嫣;人骨髓單個核細(xì)胞向肝細(xì)胞誘導(dǎo)分化的體外研究[J];胃腸病學(xué)和肝病學(xué)雜志;2003年02期

3 徐迎新,王文杰,宋旭華,王金晶,馮慶玲;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞定向肝細(xì)胞樣分化的研究[J];中華實驗外科雜志;2004年02期

本文編號：1367121