本文關(guān)鍵詞：小鼠黑色素瘤抗獨特型抗體的制備及生物活性研究　出處：《中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的： 制備抗小鼠B16黑色素瘤的抗獨特型抗體(Ab2)并進行體外實驗和鑒定，探討通過免疫效應(yīng)治療或者預(yù)防小鼠B16黑色素瘤的可能性。 方法： 分別用gp75多肽和B16細胞作為抗原免疫BALB／c小鼠，通過雜交瘤技術(shù)制備抗gp75多肽的單克隆抗體(Ab1)和抗B16細胞的單克隆抗體(Ab1)，用ELISA、Western Blot、免疫組織化學(xué)、免疫細胞化學(xué)、細胞免疫熒光染色等方法研究Ab1的特性。Ab1經(jīng)胃蛋白酶水解制備F(ab')_2片斷，F(xiàn)(ab')_2片斷偶聯(lián)載體蛋白KLH后作為抗原免疫BALB／c小鼠，用ELISA方法研究小鼠免疫血清中Ab2的特性。 結(jié)果： 獲得6株能持續(xù)、穩(wěn)定分泌抗gp75多肽單克隆抗體(Ab1)的雜交瘤細胞株，均為IgG1亞類，其中McAb D分泌穩(wěn)定、特異性強、效價高；獲得6株能持續(xù)、穩(wěn)定分泌抗B16細胞單克隆抗體(Ab1)的雜交瘤細胞株，均為IgG2a亞類，其中McAb 4分泌穩(wěn)定、特異性強、效價高。Western Blot結(jié)果顯示McAb D識別約75KD的抗原，McAb 4識別約95 KD的抗原。免疫組織化學(xué)等結(jié)果表明McAb D和McAb 4所識別的抗原均定位于細胞膜和細胞漿。檢測Ab1的F(ab')_2片斷免疫血清，結(jié)果血清中檢測到Ab2和Ab3，Ab2與Ag競爭結(jié)合Ab1。 結(jié)論： Ab1對其抗原有特異親和性，，在小鼠體內(nèi)能誘發(fā)獨特型免疫網(wǎng)絡(luò)級聯(lián)反應(yīng)，為進一步研究抗獨特型抗體奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective: To prepare anti-idiotypic antibody (Ab2) against mouse B16 melanoma and to investigate the possibility of immunotherapy or prevention of B16 melanoma in vitro. Methods: Gp75 polypeptides and B16 cells were used as antigens to immunize BALB/c mice. Hybridoma technique was used to prepare monoclonal antibody against gp75 polypeptide (Anab1) and anti-B16 cell line (B16 cell line). Western Blot was used to prepare the monoclonal antibody against B16 cells. Immunohistochemistry, immunocytochemistry and immunofluorescence staining were used to study the characteristics of Ab1. Ab1 was hydrolyzed by pepsin to prepare the fragment of Ab1. The BALB/c mice were immunized with the carrier protein (KLH) from the tip2 fragment. The characteristics of Ab2 in the immune serum of the mice were studied by ELISA method. Results: Six hybridoma cell lines, all of which were subclasses of IgG1, were obtained, which were stable and secreted monoclonal antibody against gp75 polypeptide. Among them, McAb D secreted stably and specifically. High titer; Six hybridoma cell lines, all of which secreted monoclonal antibody against B16 cells, were obtained, all of which were subclasses of IgG2a. Among them, McAb 4 secreted stably and specifically. The results of high titer. Western Blot showed that McAb D recognized about 75KD antigen. McAb 4 recognizes about 95 KD antigens. The results of immunohistochemistry indicate that the antigens recognized by McAb D and McAb 4 are located in cell membrane and cytoplasm. Ab')_2 fragment immunized serum. Results Ab2 and Ab3 + Ab2 combined with Ag were detected in serum. Conclusion: Ab1 has specific affinity to its antigen, which can induce the cascade reaction of idiotypic immune network in mice, which lays a foundation for the further study of anti-idiotypic antibody.
【學(xué)位授予單位】：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號】：R392

【共引文獻】

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本文編號：1360982