本文關鍵詞：增強型綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)染兔骨髓基質(zhì)細胞誘導的成骨樣細胞的實驗研究　出處：《四川大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的 將增強型綠色熒光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)基因轉(zhuǎn)染至由兔骨髓基質(zhì)細胞(marrow stromal cells，MSCs)誘導的成骨樣細胞中，探討EGFP作為移植細胞示蹤劑的可行性。 方法 抽取兔股骨骨髓后直接接種在含有L-DMEM完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中，24小時后首次換液，體外培養(yǎng)擴增。將傳至第4代的細胞用成骨誘導液向成骨細胞誘導，10天后檢測堿性磷酸酶(alkaline phosphatase，ALP)的活性和Ⅰ型膠原蛋白的表達。 用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染試劑將質(zhì)粒pEGFP-C1轉(zhuǎn)染至誘導的成骨樣細胞中，觀察其瞬時轉(zhuǎn)染效果；轉(zhuǎn)染72小時后，用含G418的成骨培養(yǎng)液進行篩選，繼續(xù)培養(yǎng)25天，觀察穩(wěn)定轉(zhuǎn)染情況。 結(jié)果 原代培養(yǎng)接種24小時即可見細胞貼壁生長，呈梭型、多角型的成纖維細胞樣，增殖迅速，傳代后生長情況良好。MSCs經(jīng)成骨培養(yǎng)液誘導后，，形態(tài)未發(fā)生顯著改變；但是，具有ALP的活性，并可以表達Ⅰ型膠原蛋白。經(jīng)轉(zhuǎn)染EGFP基因后25天可穩(wěn)定表達綠色熒光蛋白。 結(jié)論 EGFP能轉(zhuǎn)染到由MSCs誘導的成骨樣細胞中穩(wěn)定表達，因此可以作為骨組織工程種子細胞的示蹤劑。
[Abstract]:Objective to transfect the enhanced green fluorescent protein (EGFP) gene into osteoblast like cells induced by rabbit bone marrow stromal cells (marrow stromal cells, MSCs), and explore the feasibility of EGFP as a tracer for transplanted cells.
Flask extraction method of rabbit femoral bone marrow after direct inoculation in complete medium containing L-DMEM, 24 hours after the first medium change, then cultured in vitro. The fourth passage of cells with osteogenic differentiation was induced into osteoblasts, 10 days after the determination of alkaline phosphatase (alkaline phosphatase, ALP) activity and expression of type I collagen.
The plasmid pEGFP-C1 was transfected into the osteoblast like cells by liposome transfection reagent, and the transient transfection effect was observed. After transfection for 72 hours, the plasmid containing G418 was screened and cultured for 25 days to observe the stable transfection.
Results the cultured cells were incubated for 24 hours adherent, spindle, fibroblast like, into a multi angle type rapid proliferation after passage.MSCs grew well after osteogenic culture medium induced morphology did not change; however, with ALP activity, and expression of type I collagen. After 25 days after transfection with EGFP gene stable expression of green fluorescent protein.
Conclusion EGFP can be transfected to stable expression in osteoblast induced by MSCs, so it can be used as a tracer for bone tissue engineering seed cells.

【學位授予單位】：四川大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2006
【分類號】：R329

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