本文關鍵詞：人臍血單個核細胞體外誘導分化為神經(jīng)元樣細胞研究　出處：《山東大學》2006年碩士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：目的：研究臍血間充質干細胞(MSCs)的分離、體外培養(yǎng)、擴增以及堿性成纖維生長因子(bFGF)對臍血MSCs體外培養(yǎng)及誘導分化的影響，探討臍血間充質干細胞向神經(jīng)元樣細胞分化的條件，為臍血MSCs臨床應用治療脊髓損傷提供技術儲備和理論依據(jù)。 方法：用密度梯度離心法將臍血中單個核細胞(MNCs)從臍血中分離出來置于含20％胎牛血清(FBS)的H-DMEM培養(yǎng)液中，在37℃、5％CO2及飽和濕度培養(yǎng)箱中靜置培養(yǎng)，72h后試驗組加入bFGF，終濃度為10ng／ml，繼續(xù)培養(yǎng)并傳代，在倒置顯微鏡下追蹤觀察細胞生長情況和bFGF對臍血細胞誘導分化的影響；分別取體外培養(yǎng)后3d、7d后和13d的臍血MSCs，進行免疫組化法檢測細胞表面標志物Nestin、MAP2和GFAP。光鏡下隨機取10個非重疊視野(×100)，計算nestin、MAP2和GFAP陽性細胞占總細胞數(shù)的比例，結果用均數(shù)±標準差(x±s)％表示。陰性對照用0.01mol／L的PBS代替nestin、MAP2和GFAP單抗。取擴增一代的臍血MSCs，用含20g／L牛血清白蛋白(BSA)的PBS洗滌后制成濃度為1.0×10~6／ml的單細胞懸液，，流式細胞儀檢測臍血MSCs表面標志物。 結果：接種24h后懸浮細胞開始逐漸貼壁，培養(yǎng)后第3d，細胞形態(tài)呈圓形，卵圓形，紡錘或者逗號樣(圖a1)，nestin陽性細胞細胞可見(圖b1)，占4.3±0.8％，MAP2和GFAP染色陰性。然后細胞數(shù)目逐漸增多，有突起逐漸伸出；培養(yǎng)7d后出現(xiàn)大量的貼壁細胞，以間充質細胞為主，同時有大量的破骨樣細胞混雜，破骨樣細胞胞體較大，多個核，圓形，此時貼壁MSCs細胞形態(tài)呈長梭形，單個核，有較長的突起，折光性強(圖a2)，nestin、MAP2和GFAP陽性細胞陽性率分別為6.8％±0.6％、2.4％±0.6％和2.6％±0.8％；bFGF組與對照組相比，則細
[Abstract]:Objective : To study the effect of separation , culture , amplification and basic fibroblast growth factor ( bFGF ) on the proliferation and induction of cord blood MSCs in vitro . Methods : The mononuclear cells in cord blood were isolated from cord blood by density gradient centrifugation and cultured in H - DMEM culture medium containing 20 % fetal bovine serum ( FBS ) . After 72 h , the cells were cultured and passaged . Then , the cells were cultured and passaged at 37 鈩

本文編號：1357015