本文關(guān)鍵詞：低氧誘導(dǎo)因子1α慢病毒載體轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的成骨基因表達　出處：《中國組織工程研究》2014年01期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：背景:成骨作用和血管發(fā)生在骨的形成和修復(fù)過程中緊密結(jié)合,而低氧誘導(dǎo)因子1α被認(rèn)為是促血管新生相關(guān)基因調(diào)控中最重要的核心轉(zhuǎn)錄因子,其可促進缺氧部位血管的形成,進而促進骨的形成。目的:構(gòu)建野生型和點突變型兩個低氧誘導(dǎo)因子1α慢病毒真核表達載體Lenti-HIF1α-IRES-EGFP,并比較其對兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨基因表達的影響。方法:首先根據(jù)野生型人源低氧誘導(dǎo)因子1α基因序列信息和確定酶切位點的點突變型序列信息構(gòu)建低氧誘導(dǎo)因子1α基因野生型和點突變型兩個慢病毒真核表達載體;然后采用制備的病毒液轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。結(jié)果與結(jié)論:免疫熒光顯微鏡觀察顯示,轉(zhuǎn)染7 d后野生型組和點突變型組細(xì)胞均未見明顯熒光,轉(zhuǎn)染14 d后兩組細(xì)胞均呈現(xiàn)明顯的綠色熒光;qPCR定量分析結(jié)果表明,轉(zhuǎn)染7 d后即有低氧誘導(dǎo)因子1α和骨形態(tài)發(fā)生蛋白2基因的顯著表達,轉(zhuǎn)染14 d后,兩基因仍然顯示較高的表達水平。說明實驗成功構(gòu)建野生型和點突變型低氧誘導(dǎo)因子1α基因慢病毒真核表達載體,轉(zhuǎn)染后可以促進兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨基因的表達。
[Abstract]:Background: osteogenesis and angiogenesis are closely associated with bone formation and repair. Hypoxia inducible factor-1 偽 is considered to be the most important core transcription factor in the regulation of angiogenesis related genes. It can promote the formation of blood vessels at anoxic site. Objective: to construct the eukaryotic expression vector Lenti-HIF1 偽 -IRES-EGFP of wild type and point mutant type of hypoxia inducible factor 1 偽 lentivirus. To compare its effect on osteogenic gene expression of rabbit bone marrow mesenchymal stem cells. Firstly, two eukaryotic expression vectors of wild type human hypoxia inducible factor 1 偽 gene and point mutant gene were constructed based on the sequence information of wild type human hypoxia inducible factor 1 偽 gene and the point mutation sequence information of restriction enzyme digestion site. ; Rabbit bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) were transfected with the prepared virus solution. Results and conclusion: immunofluorescence microscopy showed that there was no obvious fluorescence in both wild-type and point-mutant cells after 7 days of transfection. After 14 days of transfection, the cells in both groups showed obvious green fluorescence. The results of qPCR quantitative analysis showed that hypoxia inducible factor 1 偽 and bone morphogenetic protein-2 gene were significantly expressed at 7 days after transfection and 14 days after transfection. The two genes still showed high expression level, which indicated that the eukaryotic expression vector of wild type and point mutant hypoxia inducible factor-1 偽 gene lentivirus was constructed successfully. Transfection can promote the expression of osteogenic gene in rabbit bone marrow mesenchymal stem cells.
【作者單位】： 同濟大學(xué)口腔醫(yī)學(xué)院;同濟大學(xué)附屬東方醫(yī)院口腔科;杭州市第一人民醫(yī)院口腔科;
【基金】：國家自然科學(xué)基金重點項目(81070806) 浙江省自然科學(xué)基金(LQ12H14002) 上海市科委醫(yī)學(xué)重點課題(10JC1413300) 杭州市醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目(2012A015)~~
【分類號】：R363
【正文快照】： 0引言Introduction充足的血供是維持細(xì)胞正常生命活動的前提,也是缺損區(qū)組織再生修復(fù)的首要條件。由于創(chuàng)傷、腫瘤等原因引起大面積頜骨缺損時,鄰近區(qū)域由于骨膜和牙齦組織萎縮、血管網(wǎng)絡(luò)受損甚至缺失而處于低氧狀態(tài),嚴(yán)重影響組織再生[1-3]。1992年Semenza等[4]首次發(fā)現(xiàn)低氧誘

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：1356636