本文關(guān)鍵詞：中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體H1和H2亞基糖識(shí)別域的克隆、原核表達(dá)及多克隆抗體的制備和鑒定　出處：《華中科技大學(xué)》2006年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： 目的本課題旨在構(gòu)建中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體(ASGPR)H1和H2亞基糖基識(shí)別域原核表達(dá)質(zhì)粒,在宿主菌內(nèi)誘導(dǎo)表達(dá)后得到純化目的蛋白,免疫小鼠,制備多克隆抗體。 方法應(yīng)用RT-PCR技術(shù),從中國旱獺肝組織中擴(kuò)增ASGPR CRDH1和CRDH2 cDNA,利用引入的限制性酶切位點(diǎn)體外連接定向克隆到原核表達(dá)載體pRSET-B內(nèi),IPTG誘導(dǎo)表達(dá),利用Ni~(2+)親合層析純化目的蛋白,并通過Western blot方法檢測目的蛋白的抗原性。用純化的重組蛋白免疫BALB/c小鼠制備多克隆抗體,并采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)、Western blotting及免疫組織化學(xué)(IHC)檢測抗體的靈敏度和特異性 結(jié)果1.通過PCR、酶切和核苷酸測序表明:成功構(gòu)建了中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體H1和H2亞基糖基識(shí)別域原核表達(dá)質(zhì)粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。2 . SDS-PAGE電泳和Western blot檢測分析表明,目的蛋白在表達(dá)菌BL21(DE3)plysS內(nèi)可以高效表達(dá),觀察到目的蛋白以包涵體的形式存在;并通過Ni~(2+)親合層析獲得了高純度的目的蛋白。3.利用目的蛋白免疫BALB/c小鼠獲得多克隆抗體,對其進(jìn)行性質(zhì)鑒定,證明多.抗具有較好的特異性和較高的效價(jià)。 結(jié)論1、成功地構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。 2、獲得的中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體H1和H2亞基糖基識(shí)別域的多克隆抗體具有特異性較好、效價(jià)較高等優(yōu)點(diǎn).。 本課題的創(chuàng)新點(diǎn) 1.國內(nèi)首次成功構(gòu)建了表達(dá)中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體H1和H2亞基糖基識(shí)別域的原核表達(dá)質(zhì)粒pRSET-B.CRDH1和pRSET-B.CRDH2。 2.國內(nèi)首次利用變性的ASGPR CRDH1和CRDH2融合蛋白免疫小鼠獲得了兩株特異性好、效價(jià)高、敏感性強(qiáng)的多克隆抗體,在肝臟疾病的靶向治療研究中具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。 本研究的意義 中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體CRDH1和CRDH2可作為靶向受體分子,對肝臟疾病靶向治療的研究起到重要的作用。利用純化的變性ASGPR CRDH1和CRDH2免疫小鼠,成功獲得了中國旱獺去唾液酸糖蛋白受體CRDH1和CRDH2的多克隆抗體。通過各種性質(zhì)鑒定,為其今后在科研方面的合理使用提供了有力的實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1355110