本文關(guān)鍵詞：TPO受體胞內(nèi)區(qū)相互作用蛋白的篩選與初步功能研究　出處：《中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2005年博士論文　論文類型：學(xué)位論文

  更多相關(guān)文章： TPO Mpl 相互作用 酵母雙雜交文庫篩選:RACK1 Atp5d

【摘要】：TPO是重要的造血生長因子,主要調(diào)控巨核細胞的增殖和血小板的生成,并能與其它因子協(xié)同作用,支持多能造血祖細胞的存活和分化。TPO通過與細胞膜上的TPO受體(Mpl)結(jié)合而發(fā)揮作用,研究Mpl的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)過程對理解TPO廣泛的生理作用有重要意義。 當(dāng)TPO與Mpl結(jié)合時,Mpl形成同源二聚體,激活與之結(jié)合的Janus激酶(JAK2),引起受體胞內(nèi)區(qū)酪氨酸殘基的磷酸化,從而引發(fā)下游STAT、Ras/Raf/MAPK、PI3K等多條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。研究發(fā)現(xiàn)缺失c-Mpl胞內(nèi)區(qū)近膜的10個氨基酸,TPO與c-Mpl結(jié)合便不能激活JAK2,但Raf、MAPK、PI3K仍可被激活;而去除Mpl胞內(nèi)區(qū)所有酪氨酸殘基,TPO仍可支持TPO依賴細胞株的增殖,這些都說明細胞內(nèi)尚存在其他未被認識的TPO受體信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路。尋找新的介導(dǎo)TPO信號的蛋白質(zhì)是本研究的目的。 我們以Mpl胞內(nèi)區(qū)蛋白為誘餌,利用酵母雙雜交的方法從小鼠胎肝文庫中釣取了16個可能同Mpl胞內(nèi)區(qū)存在相互作用的基因片段;然后通過哺乳動物細胞內(nèi)雙雜交實驗進一步篩選,去除其中2個在此系統(tǒng)下同Mpl沒有相互作用的片段;在剩余的14個基因片段中,通過對基因的功能和細胞內(nèi)定位分析,選取了8個可能同Mpl胞內(nèi)區(qū)存在相互作用的基因片段繼續(xù)研究,克隆了此8個基因片段的全長序列,并利用哺乳動物細胞內(nèi)雙雜交實驗對全長基因同Mpl的相互作用進行驗證,結(jié)果這8個全長基因同Mpl胞內(nèi)區(qū)均存在相互作用。我們選取其中的兩條基因(RACK1和Atp5d)進行了進一步研究。 RACK1是激活的PKC的受體,具有銜接蛋白的功能,已證實與許多信號分子及受體存在相互作用,可能在細胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)中起組織、聚集、調(diào)控信號分子的作用。通過Western blot實驗檢測RACK1在不同組織與細胞內(nèi)的表達情況,發(fā)現(xiàn)在表達Mpl的細胞和組織內(nèi)RACK1的表達也很豐富;通過免疫共沉淀實驗確定了在轉(zhuǎn)染細胞內(nèi)RACK1同Mpl胞內(nèi)區(qū)存在相互作用;隨后進一步用激光共聚焦
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號】：R341

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本文編號：1354147