本文關(guān)鍵詞：臍血源間充質(zhì)干細(xì)胞生物學(xué)特性及其向神經(jīng)樣細(xì)胞分化的實(shí)驗(yàn)研究　出處：《蘇州大學(xué)》2005年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：研究目的：建立人臍帶血來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)的體外培養(yǎng)、擴(kuò)增的方法及其影響因素，在此基礎(chǔ)上誘導(dǎo)其向神經(jīng)元和神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞分化，并對(duì)神經(jīng)膠質(zhì)樣細(xì)胞的生物學(xué)特性進(jìn)行初步的分析。 研究方法：1、細(xì)胞培養(yǎng)：臍血的采集由正常足月生產(chǎn)的胎盤臍靜脈穿刺抽取。單個(gè)核細(xì)胞的分離按標(biāo)準(zhǔn)的密度梯度離心法(Ficoll-Paque)獲得。所得細(xì)胞置于37℃，5％的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，規(guī)律換液，達(dá)到80％融合后用25％胰蛋白酶—0.01％EDTA混合消化液消化以1:2的比例進(jìn)行傳代培養(yǎng)。2、生物學(xué)特性的觀察：對(duì)原代傳代臍血源性MSCs的生長(zhǎng)特性進(jìn)行觀察比較，繪制其生長(zhǎng)曲線。通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)擴(kuò)增MSCs相關(guān)的抗原標(biāo)記并與源于骨髓的MSCs的表面抗原標(biāo)記相比較。3、在擴(kuò)增后的MSCs中添加5％FBS，10μmol／L維甲酸，10ng／ml腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子，10ng／ml睫狀神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的DMEM／F12，通過(guò)免疫熒光染色和PT-PCR技術(shù)檢測(cè)誘導(dǎo)后的細(xì)胞神經(jīng)元標(biāo)志物NSE、NF和神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞標(biāo)志物GFAP的表達(dá)。 研究結(jié)果：1、MSCs體外誘導(dǎo)培養(yǎng)的瓶子先予胎牛血清包被，用含低濃度胎牛血清的DMEM-LG培養(yǎng)基，適宜的離心力及室溫，換液方法的改進(jìn)均有利于純化人臍血源性MSCs的獲得。2、人臍血源性MSCs的培養(yǎng)生長(zhǎng)曲線顯示，隨著MSCs的逐漸被純化，各代細(xì)胞倍增速度基本穩(wěn)定。3、通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果顯示，臍血MSCs均一穩(wěn)定地表達(dá)相關(guān)的抗原標(biāo)記CD29、CD44、CD105，，但不表達(dá)CD34、CD45、CD106和HLA-DR，這與源于骨髓的MSCs的表面抗原標(biāo)記相一致。4、使用含有RA、BDNF、CNTF的誘導(dǎo)劑聯(lián)合誘導(dǎo)6天后，70％左右的細(xì)胞展現(xiàn)出典型神經(jīng)元樣的細(xì)胞形態(tài)，表現(xiàn)為多極的、折光性增強(qiáng)的胞體，并可伸出較長(zhǎng)的突起，胞質(zhì)逐漸回縮，呈典型的核周形態(tài)。采用神經(jīng)細(xì)胞標(biāo)志物NSE、NF和GFAP的免疫熒光法對(duì)誘導(dǎo)后的MSCs進(jìn)行鑒定，顯示，誘導(dǎo)6天后，大多數(shù)細(xì)胞表現(xiàn)為NSE、
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2005
【分類號(hào)】：R329

【引證文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1351624