發(fā)布時(shí)間：2017-12-29 09:18

  本文關(guān)鍵詞：HBV轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列的功能研究及其在核酸疫苗中的應(yīng)用　出處：《南京師范大學(xué)》2007年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】： HBV轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列(HPRE)是乙肝病毒(HBV)基因組中在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)節(jié)HBV基因表達(dá)的調(diào)控序列，廣泛存在的細(xì)胞核因子即HPRE結(jié)合蛋白與該序列結(jié)合能促進(jìn)mRNA向細(xì)胞核外轉(zhuǎn)移，從而促進(jìn)病毒基因的復(fù)制和表達(dá)，同時(shí)，由某些細(xì)胞因子誘導(dǎo)產(chǎn)生的HPRE抑制性結(jié)合蛋白與該序列某些位置結(jié)合，抑制此環(huán)節(jié)，從而阻礙病毒基因的復(fù)制和表達(dá)。 豬囊蟲是豬帶絳蟲的幼蟲，在人體內(nèi)寄生可引起囊蟲病。有關(guān)豬囊蟲病疫苗的研制有許多方法，，包括蟲體來源的天然抗原或重組抗原，蛋白亞單位疫苗，以及核酸疫苗。90年代發(fā)展起來的核酸疫苗具有能夠激發(fā)機(jī)體全面免疫發(fā)應(yīng)、不散毒、便于儲(chǔ)存和運(yùn)輸?shù)葍?yōu)點(diǎn)，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值，但其潛在的危險(xiǎn)性也是關(guān)注的焦點(diǎn)。已有研究證明以豬囊蟲共同抗原基因制備的核酸疫苗具有良好的保護(hù)率。 本研究首先以熒光素酶(luciferase，LUC)基因?yàn)閳?bào)告基因，將HBV轉(zhuǎn)錄后調(diào)節(jié)序列(HPRE)以及缺失不同功能區(qū)域的HPRE片段插入報(bào)告基因下游，構(gòu)建以下真核表達(dá)質(zhì)粒：pcDNA3.0-luc、pcDNA3.0-luc-HPRE、pcDNA3.0-luc-HPREβ_1β_2、pcDNA3.0-luc-HPREαβ_2及pcDNA3.0-luc-HPREαβ_1，轉(zhuǎn)染真核細(xì)胞，以重組人IFN-α作為誘導(dǎo)產(chǎn)生HPRE抑制性結(jié)合蛋白的刺激因子，在IFN-α作用前后，熒光素酶檢測(cè)系統(tǒng)檢測(cè)熒光素酶活性的變化。發(fā)現(xiàn)缺失功能區(qū)域β_2后，IFN-α作用前后的熒光素酶活性變化不明顯，說明HPRE抑制性結(jié)合蛋白主要與β_2發(fā)生作用。 搞清楚HPRE抑制性結(jié)核蛋白結(jié)合區(qū)域后，將不含此區(qū)域的HPRE片段插入豬囊蟲核酸疫苗pPCV中，構(gòu)建核酸疫苗pPCV-HP，免疫小鼠，測(cè)抗體滴度，并于兩周后用豬絳蟲卵攻擊，三個(gè)月后解剖觀察豬囊尾蚴數(shù)，結(jié)果顯示核酸疫苗pPCV-HP的抗體滴度高于核酸疫苗pPCV，其保護(hù)率也比核酸疫苗pPCV的保護(hù)率高8％。采集豬各組織和豬舍環(huán)境中的糞便及土壤樣品，提取各組織的總DNA和卡那抗性菌的質(zhì)粒，PCR系統(tǒng)檢測(cè)質(zhì)粒在各組織的分布、與宿主細(xì)胞基因組整合情況和轉(zhuǎn)化環(huán)境細(xì)菌的可能性。結(jié)果發(fā)現(xiàn)疫苗質(zhì)粒在注射部位以外的組織中很快被清除，在注射部位組織也未檢測(cè)到整合現(xiàn)象，擴(kuò)散和轉(zhuǎn)化環(huán)境細(xì)菌的可能性也極小。說明新構(gòu)建的核酸疫苗pPCV-HP不僅增強(qiáng)了免疫保護(hù)作用，而且具有較高的生物安全性。
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【學(xué)位授予單位】：南京師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2007
【分類號(hào)】：R392;R373

【參考文獻(xiàn)】

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1 卿玉玲;DNA疫苗安全性研究現(xiàn)狀[J];國(guó)外醫(yī)學(xué)(流行病學(xué)傳染病學(xué)分冊(cè));2002年03期

本文編號(hào)：1349687