本文關(guān)鍵詞：小鼠骨髓源耐受性樹突細(xì)胞的分離培養(yǎng)及功能鑒定　出處：《中國(guó)免疫學(xué)雜志》2014年05期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的:建立小鼠骨髓源耐受性樹突狀細(xì)胞(CD11b+F4/80+TDCs)體外培養(yǎng)及功能鑒定方法。方法:以重組小鼠粒細(xì)胞-巨噬細(xì)胞集落刺激因子(rmGM-CSF)和重組白介素4(rmIL-4)體外誘導(dǎo)小鼠骨髓細(xì)胞分化為未成熟樹突細(xì)胞(iDCs),收集第六天的細(xì)胞采用流式細(xì)胞術(shù)分離純化CD11b+F4/80+TDCs。倒置顯微鏡動(dòng)態(tài)觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,流式細(xì)胞術(shù)觀察并分選CD11b+F4/80+TDCs,CD11b+F4/80+TDCs的耐受功能通過MHCⅡ類分子、CD83、IDO、TLR-2的表達(dá)及IL-10和TGF-β1細(xì)胞因子的產(chǎn)生進(jìn)行評(píng)價(jià)。流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定MHCⅡ類分子表達(dá),免疫組化法測(cè)定CD83、IDO、TLR-2的表達(dá),ELISA法測(cè)定IL-10和TGF-β1的水平,同時(shí)設(shè)LPS刺激誘導(dǎo)的成熟樹突細(xì)胞(mDCs)作對(duì)照。結(jié)果:鏡下可見新鮮分離的骨髓細(xì)胞呈圓形,體積小,2 d后,部分細(xì)胞形態(tài)發(fā)生改變,體積增大,細(xì)胞聚集成團(tuán),培養(yǎng)5~6 d,細(xì)胞集落增多,形態(tài)不規(guī)則。同時(shí)表面出現(xiàn)較多毛刺樣突起。CD11b+F4/80+TDCs含量在23%左右,經(jīng)流式分選后細(xì)胞純度達(dá)到99%以上。與mDCs比較,CD11b+F4/80+TDCs低表達(dá)MHCⅡ和CD83,高表達(dá)IDO、TLR-2,并分泌IL-10和TGF-β1。結(jié)論:用小鼠rmGM-CSF和rmIL-4體外能成功誘導(dǎo)小鼠骨髓源CD11b+F4/80+TDCs,并且CD11b+F4/80+TDCs通過表達(dá)IL-10、TGF-β1、IDO和TLR-2顯示耐受功能。
[Abstract]:......
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)臨床藥理研究所 抗炎免疫藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(No.81330081,31100640,81173075) 省自然科學(xué)基金(No.11040606M195)資助項(xiàng)目
【分類號(hào)】：R392.12
【正文快照】： 樹突細(xì)胞(Dendritic cells,DCs)作為目前發(fā)現(xiàn)的功能最強(qiáng)大的專職抗原遞呈細(xì)胞(Antigen-presen-ting cell,APC),在參與T細(xì)胞免疫和維持外周免疫耐受中起重要作用[1,2]。DCs具有免疫原性和耐受性雙重作用,DCs的免疫原性表現(xiàn)為能夠激活初始T淋巴細(xì)胞,在T淋巴細(xì)胞依賴的體液免疫和

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1349251