發(fā)布時間：2017-12-28 14:06

  本文關鍵詞：SARS-CoV N蛋白和蛇毒去整合素Agkistin-s的表達及功能研究　出處：《浙江大學》2005年博士論文　論文類型：學位論文

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【摘要】：第一部分,SARS—Cov N基因的表達及功能研究。SARS-CoY是一種具包膜的 單股正鏈RNA病毒,它是冠狀病毒家族中新出現(xiàn)的一個種。SARS—Cov核衣殼體 蛋白N是SARS-Cov的重要的結構蛋白質之一,是在患者血清中抗體含量最多的 蛋白。為了進一步研究N蛋白的功能,我們分別利用原核和真核表達系統(tǒng)表達了 重組的N蛋白,并通過Ni2\~+柱進行了純化。用純化的蛋白免疫新西蘭大白兔,得 到了效價高、特異性好的多克隆抗血清。 以前研究發(fā)現(xiàn)PRRSV、IBV、MHV和TGEV等冠狀病毒的N蛋白都定位在細胞 質與核仁中,這可能是冠狀病毒的共有特征。序列分析發(fā)現(xiàn)SARS-Cov N蛋白基 因中也有一核定位信號序列(KKDKKK,370-376aa)。我們利用制備的多克隆抗 血清,通過桿狀病毒表達系統(tǒng)和真核表達系統(tǒng)分別在Tn-581-4和Hela細胞中對 N進行了亞細胞定位。通過共聚焦熒光顯微鏡在細胞質與核仁中都觀察到了表達 的N重組蛋白,因此,SARS-CoY核衣殼體蛋白的亞細胞定位于細胞質與核仁中, 這一現(xiàn)象可能與N蛋白的生物功能有密切聯(lián)系。 SARS-CoV病毒主要感染肺部組織,通過誘導肺組織細胞凋亡而引起損傷, 細胞凋亡可能在SARS發(fā)病中起重要的作用。進一步了解SARS-Cov病毒感染與細 胞凋亡過程所可能涉及的病毒基因將對了解SARS-CoW的致病機制有重要的意 義。定位于細胞核仁的內(nèi)源蛋白多參與細胞途徑的調(diào)節(jié),很多病毒通過其病毒基 因編碼蛋白誘導或者抑制寄主細胞信號傳導途徑來參與細胞調(diào)節(jié)。我們利用Hela 細胞,進一步研究N蛋白在誘導細胞調(diào)亡方面的作用,結果發(fā)現(xiàn)重組的N蛋白能 夠通過capsase途徑誘導Hela細胞的調(diào)亡。 第二部分,蛇毒去整合素結構域agkistin-s的表達及功能研究。去整合素 (disintegrin)是從蛇毒中分離出含有Arg-G1y-Asp(RGD)或Lys-Gly-Asp(KGD) 結構域的富含半胱氨酸的一群低分子量多肽。去整合素能夠通過其RGD三肽拮抗 血管內(nèi)皮細胞表面的整合素與細胞外基質黏附,并誘發(fā)其凋亡,從而抑制血管新 生血管的生長。腫瘤血管生成是腫瘤生長和轉移的基礎,抗血管的生成能夠有效
[Abstract]:The first part is the study of the expression and function of SARS - Cov N gene. SARS-CoY is a coated one
【學位授予單位】：浙江大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2005
【分類號】：R373

【參考文獻】

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本文編號：1346282