本文關(guān)鍵詞：HGF基因修飾的MSC生物學(xué)特性及免疫調(diào)控作用研究　出處：《中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院》2006年博士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cell，MSC)可通過(guò)細(xì)胞間作用及分泌細(xì)胞因子(HGF、TGF-β等)抑制淋巴細(xì)胞增殖，與造血干細(xì)胞共移植能夠減低GVHD的發(fā)生。肝細(xì)胞生長(zhǎng)因子(Hepatocyte growth factor,HGF)在小鼠異基因骨髓移植模型中具有免疫抑制和修復(fù)損傷作用，從多環(huán)節(jié)減輕GVHD的發(fā)生，同時(shí)保留GVL效應(yīng)。為明確MSC和HGF基因兩者聯(lián)合是否具有免疫協(xié)同效應(yīng)，我們開(kāi)展了HGF基因修飾MSC免疫調(diào)控作用的研究。期望為HGF基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞防治GVHD提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 我們利用Percoll密度梯度離心與貼壁培養(yǎng)擴(kuò)增人骨髓來(lái)源的MSC，利用酶消化后骨片培養(yǎng)的方法分離純化小鼠骨來(lái)源的MSC。上述細(xì)胞均呈貼壁生長(zhǎng)的成纖維細(xì)胞樣形態(tài)，表型特征分析顯示細(xì)胞為非造血非內(nèi)皮細(xì)胞群，分化試驗(yàn)證明細(xì)胞具有體外成骨和成脂肪能力，說(shuō)明獲得的細(xì)胞符合MSC的確認(rèn)“標(biāo)準(zhǔn)”。 在此基礎(chǔ)上，我們觀察了HGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)MSC生物學(xué)特性的影響。首先，利用攜帶GFP基因的腺病毒載體(Ad-GFP)感染MSC，以GFP為報(bào)告基因，確定了重組腺病毒對(duì)MSC的感染效率。流式檢測(cè)結(jié)果表明，腺病毒感染強(qiáng)度MOI為150時(shí)，感染效率幾乎達(dá)到了100％；我們利用相同MOI的Ad-HGF感染MSC，用ELISA法檢測(cè)HGF的分泌表達(dá)，結(jié)果表明感染后HGF可在短期內(nèi)高效表達(dá)。提示腺病毒可以有效介導(dǎo)HGF在MSC中表達(dá)。 為確定HGF基因轉(zhuǎn)染對(duì)MSC生物學(xué)特性的影響，我們檢測(cè)了轉(zhuǎn)HGF基因MSC(MSC-HGF)的細(xì)胞表型，，結(jié)果表明轉(zhuǎn)HGF基因不影響MSC表型，與未轉(zhuǎn)染基因細(xì)胞相似，MSC-HGF仍表達(dá)CD29、CD73、CD105、CD166和HLA-ABC，不表達(dá)CD31、CD34、CD45以及HLA-DR。我們進(jìn)一步檢測(cè)了MSC-HGF的分化性能，誘導(dǎo)脂肪分化后油紅O染色顯示MSC-HGF體外成脂肪能力正常；誘導(dǎo)成骨分化后進(jìn)行ALP活性染色和定量以及Ca沉積定量均表明MSC-HGF仍具有體外成骨能力；用地塞米松誘導(dǎo)后，在mRNA水平檢測(cè)到成骨、脂肪和軟骨分化相關(guān)基因的表達(dá)；另外，不誘導(dǎo)時(shí)MSC-HGF與MSC成骨、成軟骨和成脂肪標(biāo)志分子表達(dá)無(wú)差異，說(shuō)明HGF基因修飾本身不引起間充質(zhì)干細(xì)胞分化，并且不影響MSC
[Abstract]:Mesenchymal stem cell (MSC) can inhibit lymphocyte proliferation through intercellular interaction and secretion of cytokines (HGF, TGF- beta, etc.), and co transplantation with hematopoietic stem cells can reduce the occurrence of GVHD. Hepatocyte growth factor (HGF) has immunosuppression and repair injury in mouse allogeneic bone marrow transplantation model, which reduces the occurrence of GVHD from multiple links while retaining GVL effect. In order to determine whether the combination of MSC and HGF genes has an immune synergistic effect, we have carried out a study on the immunoregulation of HGF gene modified MSC. It is expected to provide an experimental basis for the HGF gene modification of bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs) for the prevention and treatment of GVHD.
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2006
【分類(lèi)號(hào)】：R346

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本文編號(hào)：1343143