發(fā)布時間：2017-12-25 20:25

  本文關(guān)鍵詞：CHO細(xì)胞表達的抗炭疽保護性抗原人源化抗體的純化及質(zhì)量控制分析　出處：《生物技術(shù)通訊》2014年06期 　論文類型：期刊論文

  更多相關(guān)文章： 炭疽 保護性抗原 人源化抗體 純化 質(zhì)量控制

【摘要】：目的:建立CHO細(xì)胞表達的抗炭疽保護性抗原人源化單抗純化工藝和質(zhì)量控制方法。方法:收獲50 L生物反應(yīng)器中無血清懸浮培養(yǎng)的CHO工程細(xì)胞培養(yǎng)液,通過高速離心去除細(xì)胞及碎片后超濾濃縮上清液,經(jīng)親和層析、SPFF陽離子交換層析后,將所得目的蛋白質(zhì)經(jīng)G25凝膠柱更換緩沖液以完成純化;對純化的產(chǎn)品進行單抗鑒別(Western印跡)、相對分子質(zhì)量(SDS-PAGE和MOLDI-TOF)、純度(SEC-HPLC)、生物學(xué)活性(毒素中和試驗)、產(chǎn)品相關(guān)雜質(zhì)(SEC-HPLC檢測聚集體、降解產(chǎn)物)、工藝相關(guān)雜質(zhì)(ELISA分析殘余宿主蛋白、殘余蛋白A)、安全性(凝膠法檢測內(nèi)毒素、薄膜過濾法考察無菌)分析。結(jié)果:樣品回收率達61.7%;單抗鑒別實驗陽性;MOLDI-TOF測定完整分子的相對分子質(zhì)量為147 995,與預(yù)期相符;單體比例為99.25%,二聚體比例為0.75%;EC50值為0.1516μg/m L。殘余宿主蛋白、殘余蛋白A、內(nèi)毒素、無菌檢查結(jié)果符合藥典要求。結(jié)論:初步建立了純化工藝和質(zhì)量控制方法,為抗炭疽人源化單抗藥物的研制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所疫苗與抗體工程研究室;解放軍306醫(yī)院檢驗科;
【分類號】：R392
【正文快照】： 炭疽是炭疽芽孢桿菌引起的人畜共患重大烈性傳染病。炭疽芽孢由于其強烈的致病力和極強的對環(huán)境的適應(yīng)能力,一直被作為重要的生物戰(zhàn)劑及生物恐怖劑[1]。炭疽芽孢桿菌外毒素由保護性抗原(protective antigen,PA)、致死因子(lethal factor,LF)和水腫因子(edema factor,EF)3種多

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本文編號：1334313