本文關鍵詞：含miR-497野生及突變結(jié)合位點的胰島素受體mRNA 3′UTR區(qū)報告基因載體的構(gòu)建和鑒定　出處：《國外醫(yī)學(醫(yī)學地理分冊)》2014年03期 　論文類型：期刊論文

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【摘要】：目的利用pmirGLO Dual-Luciferase miRNA Target Expression Vector(簡稱為pmirGLO報告基因載體)構(gòu)建并鑒定含miR-497野生及突變結(jié)合位點的胰島素受體mRNA 3′UTR區(qū)報告基因載體(pmir-Insr-3′UTR及pmirmutant-Insr-3′UTR)。方法以大鼠肝臟cDNA為模板,PCR獲取目的片段(即含miR-497野生及突變結(jié)合位點的胰島素受體mRNA 3′UTR區(qū));用PmeI、XbaI雙酶切pmirGLO報告基因載體和含miR-497野生及突變結(jié)合位點的胰島素受體mRNA 3′UTR區(qū),用T4 DNA連接酶連接純化后的酶切產(chǎn)物;連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化DH5α大腸桿菌感受態(tài)細胞并挑選陽性克隆,并通過PCR、雙酶切、DNA測序鑒定構(gòu)建的重組質(zhì)粒。結(jié)果 PCR和雙酶切證實pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR重組載體中均插入目的片段;DNA測序結(jié)果進一步證實pmir-Insr-3UTR重組載體中成功插入了胰島素受體mRNA 3′UTR區(qū),pmir-mutant-Insr-3′UTR重組載體中成功插入了在miR-497結(jié)合位點含有3個突變堿基的胰島素受體mRNA 3′UTR片段。結(jié)論成功構(gòu)建了含miR-497野生及突變結(jié)合位點的胰島素受體mRNA 3′UTR報告基因載體pmir-Insr-3′UTR及pmir-mutant-Insr-3′UTR。
【作者單位】： 西安交通大學醫(yī)學部;西安交通大學醫(yī)學部遺傳學與分子生物學系;西安交通大學醫(yī)學部環(huán)境與疾病相關基因教育部重點實驗室;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(No.81370952) 陜西省科技計劃資助項目(No.2013K21-22-03) 國家級大學生創(chuàng)新訓練資助項目(No.201310698055) 西安交通大學本科生科研訓練和實踐創(chuàng)新基金資助項目(No.2013273及No.2014X15003)
【分類號】：R3416
【正文快照】： 胰島素抵抗(Insulin resistance),是指正常數(shù)量mega),TRIzol@試劑及Lipofactamine 2000(In-的胰島素不足以產(chǎn)生對脂肪細胞、肌肉細胞和肝細胞vitrogen),反轉(zhuǎn)錄試劑盒RevertaidTM First Strand的正常的胰島素響應的狀況,是嚴重危害人來健康的cDNA Synthesis及Pmel和Xbal限制性

【共引文獻】

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9 徐t，

本文編號：1321983