本文關(guān)鍵詞：六味地黃丸對(duì)兔椎間盤(pán)體外退變模型椎間盤(pán)細(xì)胞外基質(zhì)組分的影響　出處：《湖南中醫(yī)藥大學(xué)》2016年碩士論文　論文類(lèi)型：學(xué)位論文

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【摘要】：目的:通過(guò)觀察六味地黃丸對(duì)兔椎間盤(pán)體外退變模型外基質(zhì)組分的影響,探討六味地黃丸防治椎間盤(pán)退變的療效。方法:選取6月齡清潔級(jí)新西蘭兔20只,參照Haschtmann方法建立整體椎間盤(pán)體外培養(yǎng)體系。空氣栓塞法處死動(dòng)物,無(wú)菌條件下采用后正中入路或經(jīng)腹腔前入路取出帶終板的L1-L6椎間盤(pán)100只,盡量去除終板上附著的的骨組織及韌帶,保留終板軟骨的完整性,連續(xù)以0.9%Na Cl溶液,聚烯吡酮磺溶液以及含55mmol/L檸檬酸鈉、50μg/m L慶大霉素的Hanks液漂洗。椎間盤(pán)樣本置于六孔板中,放在轉(zhuǎn)鼓上(轉(zhuǎn)鼓的轉(zhuǎn)速為10r?h-1),以含5%胎牛血清、50μg/m L慶大霉素、20mmol/L檸檬酸鈉的DMEM/F12培養(yǎng),置于37℃、5%CO2、100%相對(duì)濕度溫箱中過(guò)夜。隨機(jī)分為空白對(duì)照組、TNF-α組、p38-JNK/SAPK阻斷組、六味地黃丸血清組,TNF-α+含六味地黃丸血清組。將過(guò)夜后標(biāo)本接種于六孔板,加入8ml含10%胎牛血清、50μg/m L慶大霉素、25μg/m L維生素C的DMEM/F12,置于37℃、5%CO2、100%相對(duì)濕度溫箱中培養(yǎng),每?jī)商鞊Q液一次。TNF-α組培養(yǎng)液中另含10ng/μl TNF-α2μl;p38-JNK阻斷組另含p38MAPK特異性阻斷劑SB203580,JNK特異性阻斷劑SP600125各20μmol/L各10μl,10ng/μl TNF-α2μl,六味地黃丸血清組培養(yǎng)液中另含六味地黃丸血清10%;TNF-α+含六味地黃丸血清組含10ng/μl TNF-α2μl,六味地黃丸血清10%。分別于培養(yǎng)的第2、4、8、14天收集標(biāo)本待測(cè)。結(jié)果:TNF-α組與空白組相比較,TNF-α組蛋白多糖的表達(dá)及mRNA含量、糖胺多糖含量、硫酸軟骨素和硫酸角質(zhì)素的比值、透明質(zhì)酸含量、II型膠原的表達(dá)及m RNA含量明顯低于空白組,I型膠原含量及m RNA表達(dá)明顯高于空白組,P0.05,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明兔椎間盤(pán)體外退變模型成功建立。TNF-α+含六味地黃丸血清組與TNF-α組相比較,TNF-α+含六味地黃丸血清組蛋白多糖的表達(dá)及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸軟骨素和硫酸角質(zhì)素的比值、透明質(zhì)酸含量、II型膠原的表達(dá)及m RNA含量明顯高于TNF-α組;I型膠原含量及m RNA表達(dá)明顯低于TNF-α組,P0.05,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明經(jīng)六味地黃丸含藥血清干預(yù)后,具有延緩體外椎間盤(pán)退變的效果。TNF-α+含六味地黃丸血清組與p38-JNK組相比較,TNF-α+含六味地黃丸血清組蛋白多糖的表達(dá)及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸軟骨素和硫酸角質(zhì)素的比值、透明質(zhì)酸含量、II型膠原的表達(dá)及m RNA含量明顯低于p38-JNK組;I型膠原含量及m RNA表達(dá)明顯高于p38-JNK組,P0.05,其差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,說(shuō)明p38-JNK通路存在,且比TNF-α+含六味地黃丸血清組延緩體外椎間盤(pán)退變的效果更明顯。TNF-α+含六味地黃丸血清組內(nèi)標(biāo)本,2天與4天、4天與8天、8天與14天相比較,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兔蛋白多糖的表達(dá)及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸軟骨素和硫酸角質(zhì)素的比值、透明質(zhì)酸含量、II型膠原的表達(dá)及m RNA含量逐步下降,I型膠原含量及m RNA表達(dá)含量逐步上升,但與TNF-α組比較,趨勢(shì)較小,表明六味地黃丸能有效延緩椎間盤(pán)的退變;TNF-α組內(nèi),2天與4天、4天與8天、8天與14天相比較,P0.05,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,兔蛋白多糖的表達(dá)及m RNA含量、糖胺多糖含量、硫酸軟骨素和硫酸角質(zhì)素的比值、透明質(zhì)酸含量、II型膠原的表達(dá)及m RNA含量逐步下降,I型膠原含量及m RNA表達(dá)含量逐步上升,也說(shuō)明椎間盤(pán)退變模型成功建立;六味地黃丸組與空白組比較cP0.05,其差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:在椎間盤(pán)體外退變模型中,隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng),終板細(xì)胞數(shù)量逐漸減少,軟骨終板超微結(jié)構(gòu)逐漸損傷,糖胺多糖含量、硫酸軟骨素/硫酸角質(zhì)素比值、透明質(zhì)酸含量,蛋白多糖及m RNA的表達(dá)、II型膠原及m RNA的表達(dá)逐漸降低,I型膠原及m RNA的表達(dá)逐漸上升,六味地黃丸含藥血清能延緩這一變化,但差異無(wú)顯著性意義(p0.05),在培養(yǎng)基中加入TNF-α能明顯上調(diào)I型膠原及m RNA的表達(dá),下調(diào)糖胺多糖含量、硫酸軟骨素/硫酸角質(zhì)素比值、透明質(zhì)酸含量,蛋白多糖及m RNA、II型膠原及m RNA的表達(dá),六味地黃丸含藥血清可部分對(duì)抗TNF-α所導(dǎo)致的改變。
【學(xué)位授予單位】：湖南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R285.5;R-332

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本文編號(hào)：1311868