發(fā)布時間：2017-12-13 10:30

  本文關(guān)鍵詞：Lentivirus載體對許旺細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率

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【摘要】：背景:近年來研究較多的LV載體,因其強(qiáng)大的轉(zhuǎn)染能力以及較高的轉(zhuǎn)染效率等特點(diǎn),在基因轉(zhuǎn)染的實(shí)驗(yàn)中應(yīng)用越來越廣泛。目的:進(jìn)一步驗(yàn)證Lentivirus載體在體外對原代許旺細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率。方法:以Lentivirus三質(zhì)粒系統(tǒng)構(gòu)建病毒載體,在體外分別以MOI值為1,5,10,20,40對原代大鼠許旺細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后第1,3,5,7,9天在熒光顯微鏡下觀察Lentivirus攜帶的熒光表達(dá)情況,并在顯微鏡的計(jì)數(shù)方格內(nèi)計(jì)算細(xì)胞的轉(zhuǎn)染情況。發(fā)出綠色熒光的為轉(zhuǎn)染成功的許旺細(xì)胞,否則認(rèn)為沒有轉(zhuǎn)染病毒載體的,從而算出轉(zhuǎn)染效率。結(jié)果與結(jié)論:在病毒轉(zhuǎn)染3 d后,在各不同MOI值的培養(yǎng)孔中,均能觀察到極少量的熒光反應(yīng),在第5天時,熒光數(shù)量較前明顯增多。第7天時達(dá)到高峰,第9天的熒光數(shù)量與第7天變化不明顯。從細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率來看,不同的MOI值明顯不同,MOI值為1時的轉(zhuǎn)染效率約為45%,MOI值為5時為80%,MOI值為10時為90%,MOI值為20時為78%,MOI值為40時轉(zhuǎn)染效率為70%。
【作者單位】： 上海市第六人民醫(yī)院;上海長海醫(yī)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30571887) 中國博士后科學(xué)基金(20080430663)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 0引言Introduction的37℃培養(yǎng)箱培養(yǎng)1 h后追加培養(yǎng)基。次日加入阿糖胞苷近十幾年來,神經(jīng)科學(xué)工作者對許旺細(xì)胞移植治療脊(終濃度為10-5 mol/L),24 h后吸除含有阿糖胞苷的培養(yǎng)液,髓損傷進(jìn)行了初步的探索[1-5],并證實(shí)許旺細(xì)胞移植可以促加入體積分?jǐn)?shù)10%胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液(分

【參考文獻(xiàn)】

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3 陳哲宇,曹莉,路長林,何成,鮑t，

本文編號：1284841