發(fā)布時(shí)間：2017-12-10 02:10

  本文關(guān)鍵詞：NLRP3基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建和定位

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【摘要】：目的:構(gòu)建人NLRP3真核表達(dá)載體,并證實(shí)融合蛋白在人心肌細(xì)胞中定位。方法:以人胎腦cDNA文庫為模版,PCR擴(kuò)增NLRP3全長(zhǎng)編碼基因,亞克隆至p3×FLAG-cmvTM-10表達(dá)載體中。將構(gòu)建的重組質(zhì)粒測(cè)序并轉(zhuǎn)染到人心肌細(xì)胞中,提取細(xì)胞蛋白進(jìn)行Western blotting檢測(cè)。利用激光共聚焦掃描顯微鏡觀察FLAG-NLRP3在HCM細(xì)胞內(nèi)定位。結(jié)果:NLRP3全長(zhǎng)基因序列克隆到了真核表達(dá)載體p3×FLAG-cmvTM-10中,酶切鑒定片段大小3 111 bp。Western blotting檢測(cè)到了融合蛋白FLAG-NLRP3表達(dá),分子量約為114 kD。FLAG-NLRP3在人心肌細(xì)胞中表達(dá),定位于細(xì)胞漿內(nèi)。結(jié)論:成功構(gòu)建了FLAG-NLRP3全長(zhǎng)基因真核表達(dá)載體,FLAG-NLRP3蛋白主要定位于心肌細(xì)胞漿內(nèi)。
【作者單位】： 中國(guó)人民解放軍第202醫(yī)院心血管內(nèi)科;
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 炎癥反應(yīng)是心血管疾病的重要病理過程,而炎癥小體形成是調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)發(fā)生的重要部分。它能夠?qū)?xì)菌、病毒等致病因子做出應(yīng)答反應(yīng),也能夠調(diào)節(jié)非感染性疾病,如風(fēng)濕病、痛風(fēng)等[1]。炎癥小體還參與心肌梗死、再灌注損傷等心血管疾病的發(fā)病。NLR家族pyrin結(jié)構(gòu)3(NLRP3)炎癥小體是細(xì)

【參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 代煒;沈濤;李彥姝;譚學(xué)新;;Id3上調(diào)E-cadherin表達(dá)抑制口腔鱗狀細(xì)胞癌的侵襲[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2013年02期

2 夏冬;甘云輝;姚暉;徐亮;;攜改良rHBVpre-S1基因酵母表達(dá)載體的構(gòu)建及其免疫原性鑒定[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2013年04期

【共引文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 齊斌;任威;李春江;張銳;;人心肌細(xì)胞中NLRP3融合蛋白表達(dá)的鑒定[J];廣西醫(yī)學(xué);2014年01期

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 胡茂志;NLRC4炎性體的活化在沙門菌感染防御中的作用研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2014年

中國(guó)碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 劉倩倩;syk、JNK調(diào)控單核細(xì)胞增生李斯特菌感染過程中炎癥復(fù)合體活化機(jī)制的研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2014年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 代煒;姚遠(yuǎn);李彥姝;張紅艷;李妍;秦興軍;;TGF-β/TβR1通路通過上調(diào)MMP2表達(dá)促進(jìn)頭頸鱗狀細(xì)胞癌侵襲[J];東南大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2012年05期

2 高霞;李卓成;佘吉佳;陳劍雄;李麗明;;乙肝病毒Pre-S1檢測(cè)在乙型肝炎診斷中的作用[J];現(xiàn)代醫(yī)學(xué);2009年04期

3 陳旭;湯玲玲;陳敏;張丹丹;郭艷;;Notch2在人恒牙牙髓及牙乳頭中表達(dá)研究[J];中國(guó)實(shí)用口腔科雜志;2012年07期

【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 吳宏,張紹昆,王桂云,張曉光1;人堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];吉林大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2002年04期

2 高全文,董紹忠,陳希哲,陳琰,楊連甲;人血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子165基因真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2003年01期

3 廖榮霞,孫建國(guó),陳正堂,周建新;小鼠肝臟特異的微RNA真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];重慶醫(yī)學(xué);2004年07期

4 代芳,王佑民,王長(zhǎng)江,佘其美,周劍,時(shí)照明,胡紅琳;人過氧化物酶體增殖體激活受體γ2基因克隆及真核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2004年06期

5 汲振余;李肖蕖;禹麗娜;趙立群;張聚真;裘一兵;張亞冰;裘宋良;楊觀瑞;;野生型抑癌基因PTEN真核表達(dá)載體的構(gòu)建及鑒定[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2005年06期

6 寧寒冰;張玲;李建生;李繼昌;;端粒重復(fù)序列結(jié)合因子2真核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2006年03期

7 吳波;陳秉;熊群英;容振勤;張偉林;李永浩;;人血管內(nèi)皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子165基因真核表達(dá)載體構(gòu)建[J];醫(yī)學(xué)研究雜志;2006年01期

8 唐昊U，

本文編號(hào)：1272719