本文關(guān)鍵詞：EV71兩種結(jié)構(gòu)形式的免疫學(xué)特性比較

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【摘要】：目的分析腸道病毒71型(Enterovirus 71,EV71)在病毒增殖的動(dòng)力學(xué)過程中不同時(shí)間點(diǎn)的病毒樣品所具有的兩種結(jié)構(gòu)形式及免疫學(xué)特性,為疫苗的研發(fā)及質(zhì)控提供參考。方法利用Opti Prep密度梯度離心獲得EV71兩種結(jié)構(gòu)形式,電鏡掃描觀察兩種結(jié)構(gòu)形式的顆粒形態(tài);采用病毒微量滴定法測定病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的感染性滴度;EV71抗原生物素-親和素酶聯(lián)免疫(BA-ELISA)方法測定病毒兩種結(jié)構(gòu)形式的抗原含量;QRT-PCR法測定兩種結(jié)構(gòu)形式的病毒RNA含量;SDS-PAGE及Western blot鑒定病毒兩種結(jié)構(gòu)形式。將分離得到的空殼及實(shí)心病毒顆粒成分用甲醛滅活后,與Al(OH)3佐劑混合,對小鼠進(jìn)行皮下多點(diǎn)注射,分別于初免28 d及二免7、14 d,經(jīng)小鼠尾靜脈采血,分離血清,采用微量中和試驗(yàn)法檢測抗EV71中和抗體;將二免14 d后的雄、雌鼠合籠,生產(chǎn)后24 h內(nèi),用EV71FY-23對乳鼠進(jìn)行顱內(nèi)注射,10 d內(nèi)觀察乳鼠存活率。結(jié)果經(jīng)Opti Prep密度梯度離心后,可獲得兩條沉降系數(shù)不同的病毒條帶,位于上層的病毒結(jié)構(gòu)成份基本以空心衣殼顆粒形式存在;下層病毒結(jié)構(gòu)成分在感染前期主要為以實(shí)心顆粒形式存在,感染后期則以空殼和實(shí)心顆粒同時(shí)存在,兩種結(jié)構(gòu)形式均能被抗EV71特異血清識(shí)別。在病毒感染過程中,下層毒粒感染性滴度均比上層毒粒高2~3個(gè)log值;兩種結(jié)構(gòu)形式的抗原滴度均呈增加的趨勢,但下層毒�？乖味仍黾痈鼮槊黠@;病毒兩種結(jié)構(gòu)形式兩層的RNA含量不同,下層毒粒中VP0均已裂解形成VP2和VP4,而上層毒粒中以VP0為主要成分。初免后28 d及二免后7、14 d,兩種結(jié)構(gòu)形式的EV71均誘導(dǎo)小鼠抗體陽轉(zhuǎn),但上層毒粒誘導(dǎo)的中和抗體效價(jià)及增長速度均明顯低于下層毒粒(P均0.001)。病毒兩種結(jié)構(gòu)形式免疫小鼠產(chǎn)生的乳鼠免疫保護(hù)效率均為100%。結(jié)論 EV71的兩種結(jié)構(gòu)形式雖然具有差異,但作為病毒疫苗抗原用于免疫時(shí),均具有免疫學(xué)意義。
【作者單位】： 中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所云南省重大傳染病疫苗研發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家“973”計(jì)劃項(xiàng)目(2011CB504903) 國家“863”計(jì)劃項(xiàng)目(2012AA02A404) 云南省應(yīng)用基礎(chǔ)研究計(jì)劃面上項(xiàng)目(2011FB116)
【分類號】：R373.2;R392-33
【正文快照】： EV71是引起手足口病(handfoot and mouth dis-ease,HFMD)的主要病原之一[1]。EV71感染可引起嚴(yán)重并發(fā)癥及死亡[2]。由于目前尚無有效治療藥物,因此,EV71的免疫學(xué)特性及其疫苗研究日益受到重視。分子病毒學(xué)方面的研究表明,EV71與其他人類腸道病毒,如脊髓灰質(zhì)炎病毒結(jié)構(gòu)相似[3-4

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【相似文獻(xiàn)】

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10 賴s

本文編號：1259677