本文關(guān)鍵詞：過早衰老髓核細胞微環(huán)境中BMSCs的生物學行為研究

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【摘要】：目的探討在過早衰老髓核細胞(nucleus pulposus cells,NPCs)微環(huán)境中BMSCs的生物學行為,為充分利用BMSCs干細胞特性進行退變椎間盤修復奠定實驗基礎。方法收集人退變髓核組織與正常骨髓組織進行NPCs、BMSCs分離、培養(yǎng)及鑒定;對過早衰老誘導的第1代NPCs和正常第3代BMSCs行非接觸共培養(yǎng),根據(jù)NPCs與BMSCs不同比例將實驗分為A組(75%∶25%)、B組(50%∶50%)和C組(0∶100%)。倒置相差顯微鏡和透射電鏡觀察各組BMSCs形態(tài)變化;對培養(yǎng)3、6 d的BMSCs進行增殖能力檢測:細胞計數(shù)試劑盒8檢測細胞活力、流式細胞儀檢測細胞周期、BrdU標記流式檢測DNA代謝;培養(yǎng)6 d檢測衰老相關(guān)β半乳糖苷酶(senescence associatedβ-galactosidase,SA-β-gal)活性評價細胞衰老。結(jié)果倒置相差顯微鏡示A、B組BMSCs中混雜的三角形或大多角形細胞增多,尤其是A組;透射電鏡觀察A、B組均可見典型衰老形態(tài)的細胞。培養(yǎng)3、6 d,A組細胞存活率均顯著低于B組,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3 d時,A組G1期細胞比例明顯高于B、C組(P0.05),S期細胞比例明顯低于B、C組(P0.05)。6 d時,A組約81.0%細胞停滯于G1期,S期及G2期細胞比例減小,與B、C組比較各細胞周期分布差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05);B組細胞停滯于G1期比例增加至約74.4%,與C組比較各細胞周期分布差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。培養(yǎng)3、6 d,A組摻入的BrdU含量均明顯低于B、C組(P0.05);B、C組間3 d時差異無統(tǒng)計學意義(P0.05),6 d時B組明顯低于C組(P0.05)。培養(yǎng)6 d,A、B組SA-β-gal活性顯著提高,3組間比較差異均有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論過早衰老的NPCs可通過旁分泌效應下調(diào)共培養(yǎng)的BMSCs增殖能力,而NPCs數(shù)量上的優(yōu)勢使得共培養(yǎng)的BMSCs更早表現(xiàn)出衰老特征。
【作者單位】： 東南大學附屬中大醫(yī)院骨科;
【基金】：國家自然科學基金資助項目(31070876、81071493) National Natural Science Foundation of China(31070876,81071493)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： BMSCs移植為退變椎間盤的細胞重建及功能恢復提供了一種全新治療策略,已顯示出巨大潛能[1-4]。但退變椎間盤由于存在生長因子匱乏、營養(yǎng)障礙、異常細胞接觸等應激因素[5-6],可能會導致移植的BMSCs干細胞特性發(fā)生改變,從而不利于退變椎間盤生物學修復。與多次分裂后端粒縮短引

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