本文關(guān)鍵詞：Ficolin 3的表達(dá)、純化及其對(duì)RAW264.7巨噬細(xì)胞的活化作用

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【摘要】：目的構(gòu)建人ficolin-3基因的原核表達(dá)載體在大腸桿菌中表達(dá)后純化,檢測(cè)可溶性His-ficolin在誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞系RAW264.7活化中的作用。方法從人外周血單個(gè)核細(xì)胞cDNA中擴(kuò)增人ficolin-3基因的cDNA序列,將其插入pET22原核表達(dá)載體中,酶切鑒定并測(cè)序驗(yàn)證重組質(zhì)粒pET22b-ficolin 3后,在大腸桿菌BL21中誘導(dǎo)表達(dá)并純化His-ficolin 3。以His蛋白為對(duì)照,利用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)不同濃度可溶性His-ficolin 3對(duì)RAW264.7細(xì)胞吞噬雞紅細(xì)胞能力的影響,利用ELISA檢測(cè)His-ficolin 3對(duì)RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α的影響。結(jié)果酶切鑒定獲得預(yù)期目的片段,測(cè)序證實(shí)重組質(zhì)粒pET22b-ficolin 3構(gòu)建成功。SDS-PAGE提示相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)33 000處有可溶性目的蛋白His-ficolin 3表達(dá),His柱純化后產(chǎn)物純度在90%以上。Western blot法檢測(cè)證實(shí)純化產(chǎn)物為His-ficolin 3。和His蛋白相比,His-ficolin 3對(duì)RAW264.7細(xì)胞的吞噬能力具有劑量依賴(lài)性,即His-ficolin3濃度越高,吞噬能力越強(qiáng);此外,His-ficolin3能顯著誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞分泌IL-6、IL-12和TNF-α等炎性細(xì)胞因子。結(jié)論成功構(gòu)建了pETb-Ficolin 3重組載體并獲得了純度為90%以上的His-ficolin 3。His-ficolin 3能夠顯著促進(jìn)巨噬細(xì)胞RAW264.7的活化。
【作者單位】： 寧夏人民醫(yī)院腎內(nèi)科;寧夏人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;寧夏醫(yī)科大學(xué)總醫(yī)院放射科;
【基金】：寧夏自然科學(xué)基金(NZ11157) 寧夏科技攻關(guān)項(xiàng)目(2009032)
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 系統(tǒng)性紅斑狼瘡(systemic lupus erythematosus,SLE)是一種病因未明、侵犯全身結(jié)締組織的自身免疫性疾病,病變累及多系統(tǒng)、多臟器。血漿過(guò)濾(filtrationplasmapheresis,FPP)是目前SLE腎損害患者的有效治療手段之一,能夠有效除去血漿中存在的大分子免疫復(fù)合物、補(bǔ)體和抗體等致

【參考文獻(xiàn)】

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1 顧勇;薛駿;;血漿凈化治療系統(tǒng)性紅斑狼瘡臨床進(jìn)展[J];中國(guó)實(shí)用內(nèi)科雜志;2009年06期

2 郭江濤;王志軍;曹旭晴;曹麗;鄭亞莉;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎血清差異蛋白質(zhì)的篩選[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年11期

【共引文獻(xiàn)】

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4 郭江濤;王志軍;曹旭晴;曹麗;鄭亞莉;;系統(tǒng)性紅斑狼瘡腎炎血清差異蛋白質(zhì)的篩選[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年11期

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【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

中國(guó)期刊全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前2條

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【相似文獻(xiàn)】

中國(guó)博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫(kù) 前1條

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本文編號(hào)：1224921