本文關(guān)鍵詞：小鼠肺細(xì)小動脈平滑肌細(xì)胞原代培養(yǎng)和鑒定以及低氧對其增殖與凋亡的影響

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【摘要】：目的:建立一種方法簡單、重復(fù)性好、培養(yǎng)周期短的小鼠肺細(xì)小動脈平滑肌細(xì)胞(PASMCs)原代培養(yǎng)及傳代方法,并初步探索低氧下小鼠PASMCs的增殖與凋亡情況。方法:無菌條件顯微鏡下分離小鼠肺細(xì)小動脈,經(jīng)膠原酶I消化結(jié)合血清鋪底法培養(yǎng)PASMCs。傳代過程中棄除對細(xì)胞損傷大的離心步驟。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),免疫細(xì)胞化學(xué)法和免疫熒光染色法進(jìn)行α-平滑肌肌動蛋白鑒定,CCK-8顯法及TUNEL法測定低氧下PASMCs的增殖與凋亡情況。結(jié)果:形態(tài)學(xué)觀察、免疫細(xì)胞化學(xué)法和免疫熒光染色法鑒定均表明培養(yǎng)的細(xì)胞為PASMCs。與大鼠傳代后的PASMCs典型的"峰-谷"樣生長相比,傳代后的小鼠PASMCs形態(tài)各異,沒有此典型"峰-谷"規(guī)律。原代培養(yǎng)后5~7 d即傳代,依據(jù)細(xì)胞活性可傳3~5代。CCK-8法顯示,與常氧組24 h比較,低氧組A值升高(P0.05)。TUNEL法結(jié)果顯示低氧24 h后凋亡率較常氧組下降(P0.05)。結(jié)論:膠原酶I消化結(jié)合血清鋪底法培養(yǎng)小鼠PASMCs,方法簡單,培養(yǎng)周期短,重復(fù)性好,是一種值得推廣的小鼠PASMCs體外培養(yǎng)方法。低氧可以促進(jìn)小鼠PASMCs的增殖,抑制小鼠PASMCs的凋亡。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院呼吸循環(huán)重點實驗室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81270110) 浙江省自然科學(xué)基金資助項目(No.LY13H010003)
【分類號】：R-33
【正文快照】： 近年來基因敲除和基因?qū)胄∈竽Ｐ鸵褟V泛應(yīng)用于肺循環(huán)疾病的在體研究[1]。而體外模型仍以大 鼠為主要研究對象,基因敲除小鼠由于技術(shù)問題難以進(jìn)入體外研究領(lǐng)域,特別是小鼠肺細(xì)小動脈平滑肌細(xì)胞(pulmonary arteriolar smooth muscle cells,PASMCs)的傳代培養(yǎng),國內(nèi)外鮮少報道

【參考文獻(xiàn)】

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2 邵榮標(biāo),錢R慊，

本文編號：1220108