本文關(guān)鍵詞：模擬糞便標(biāo)本單增李斯特菌和伊氏李斯特菌TaqMan雙重實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)檢測(cè)方法

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【摘要】：目的建立一種TaqMan雙重實(shí)時(shí)熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(real-time PCR),用于模擬糞便標(biāo)本中單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的快速檢測(cè)。方法以單增李斯特菌特異基因hly和伊氏李斯特菌特異基因smcL作為靶基因,合成2對(duì)引物和其相應(yīng)的熒光探針,制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,建立從模擬糞便標(biāo)本中直接檢測(cè)單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的TaqMan雙重real-time PCR。利用李斯特菌屬中其他種李斯特菌及常見(jiàn)致病菌驗(yàn)證引物、探針的特異性;通過(guò)制備模擬糞便標(biāo)本并對(duì)其進(jìn)行二次增菌后,分別提取DNA,采用TaqMan雙重real-time PCR進(jìn)行檢測(cè),以達(dá)到快速檢測(cè)單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的目的。結(jié)果采用本研究建立的TaqMan雙重real-time PCR對(duì)模擬糞便標(biāo)本的檢測(cè)結(jié)果顯示特異性良好,與其他種李斯特菌和其他病原菌均無(wú)交叉反應(yīng)。模擬糞便標(biāo)本中單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的檢測(cè)下限分別為2.45×103cfu/g和2.92×103cfu/g;模擬糞便標(biāo)本在3 h內(nèi)可得出檢測(cè)結(jié)果,當(dāng)模擬糞便標(biāo)本中單增李斯特菌含量為6 cfu/g和伊氏李斯特菌含量為5 cfu/g時(shí),經(jīng)過(guò)增菌后使用雙重real-time PCR可檢測(cè)出陽(yáng)性結(jié)果。結(jié)論本研究建立了以單增李斯特菌的特異基因hly和伊氏李斯特菌的特異基因smcL為靶基因的TaqMan雙重realtime PCR檢測(cè)方法,該方法具有特異性好、敏感性高、快速易操作等優(yōu)點(diǎn),可用于臨床、食品及環(huán)境標(biāo)本的快速診斷,以及我國(guó)人群中單增李斯特菌和伊氏李斯特菌的攜帶或感染狀況的調(diào)查分析。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心傳染病預(yù)防控制所 傳染病預(yù)防控制國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;貴陽(yáng)醫(yī)學(xué)院微生物學(xué)教研室;
【基金】：國(guó)家科技重大傳染病防治專項(xiàng)(No.2011ZX10004-001,2013ZX10004-101)~~
【分類號(hào)】：R346
【正文快照】： 李斯特菌屬為革蘭陽(yáng)性短桿菌,廣泛存在于環(huán)境中,目前已證實(shí)致病李斯特菌為單增李斯特菌和伊氏李斯特菌[1]。單增李斯特菌是一種重要的食源性病原菌,能造成人和動(dòng)物的腦膜炎、敗血癥、肺炎、發(fā)熱性胃腸炎、流產(chǎn)等疾病,致病性強(qiáng),致死率高達(dá)30%[2-3]。伊氏李斯特菌于1955年首次在

【參考文獻(xiàn)】

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4 徐冬e，

本文編號(hào)：1215975