本文關(guān)鍵詞：miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和調(diào)控胚胎中內(nèi)胚層器官形成

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【摘要】：研究目的:探討miR-30c在調(diào)控細(xì)胞分化中的作用及對脊椎動物早期胚胎發(fā)育的影響。方法:1、生物信息學(xué)分析:1)從miRBase數(shù)據(jù)庫(http://www.mirbase.org/)中獲取各物種mi R-30家族成員的核苷酸序列,并用軟件Clustal W進(jìn)行多序列比對。2)以miR-30家族成員各自原始轉(zhuǎn)錄本(pri-miR-30)核苷酸序列為基礎(chǔ)的種系樹由軟件MEGA5中鄰接法(neighbor-joining method)計算建立。2、Taq Man PCR技術(shù)和胚胎整體原位雜交技術(shù):斑馬魚基因組DNA抽提,PCR和探針質(zhì)粒構(gòu)建,地高辛標(biāo)記反義RNA探針準(zhǔn)備,胚胎整體原位雜交,基于TaqMan PCR技術(shù)的miRNA表達(dá)分析。3、顯微注射mi R-30c-duplex、顯微注射嗎啡啉(morpholino)環(huán)標(biāo)記的反義寡核苷酸:分別將morpholino(嗎啡啉修飾反義寡核苷酸鏈morpholino,dre-miR-30c-MO)、duplex(miR-30c-duplex)和mRNA(體外轉(zhuǎn)錄合成的egfp-cxcr4a-3’UTR mRNA、egfp-cxcr4a-3’UTR(miR-30cmut)mRNA)經(jīng)顯微注射進(jìn)入胚胎細(xì)胞并設(shè)對照組。4、進(jìn)行miRNA靶基因預(yù)測分析并和全胚胎miRNA靶基因報道系統(tǒng)比對。結(jié)果:1、miR-30c母源性低表達(dá),原腸后期至體節(jié)中期呈廣泛表達(dá)且中內(nèi)胚層表達(dá)豐富,受精后24小時特異性表達(dá)于胚胎原腎管。2、過表達(dá)miR-30c斑馬魚胚胎表現(xiàn)為中內(nèi)胚層細(xì)胞向胚胎中線遷移能力下降,最終呈現(xiàn)雙心畸形和內(nèi)臟畸形。3、特異性抑制miR-30c的成熟,可增強(qiáng)斑馬魚胚胎中內(nèi)胚層細(xì)胞向中線遷移的能力。4、細(xì)胞遷移相關(guān)因子cxcr4a是miR-30c的潛在靶基因之一。結(jié)論:1、初步探討miR-30c在胚胎發(fā)生早期的時空表達(dá)模式。2、miR-30c是中內(nèi)胚層細(xì)胞向中線遷移和器官形成的重要調(diào)控因子。3、通過上調(diào)Cxcr4a蛋白的信號強(qiáng)度可保障胚胎的正常發(fā)育。
【學(xué)位授予單位】：蘇州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R321

【相似文獻(xiàn)】

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 毛琳;miRNA-30c靶向抑制cxcr4a和調(diào)控胚胎中內(nèi)胚層器官形成[D];蘇州大學(xué);2015年

2 安云鶴;文昌魚Hedgehog信號通路重要成員和Rbx1基因以及TLR2蛋白表達(dá)的研究[D];山東大學(xué);2007年

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本文編號：1209519