本文關(guān)鍵詞：BCSC-1基因慢病毒干擾載體的構(gòu)建與鑒定

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【摘要】：目的構(gòu)建BCSC-1基因慢病毒RNA干擾載體并感染人乳腺癌細胞MCF-7,實時熒光定量PCR(QPCR)檢測干擾效果。方法 設(shè)計并合成兩條針對人BCSC-1基因的干擾序列(BCSC-1 shRNA1和BCSC-1shRNA2)以及對照序列(NS),將其連接入載體PLKO.1-sp6-pgk-GFP中,得到兩個干擾載體和一個陰性對照載體。通過菌落PCR、雙酶切和DNA序列測定等方法對其進行鑒定。將干擾載體與輔助包裝質(zhì)粒Lipofectamine2000共轉(zhuǎn)染HEK293T細胞包裝慢病毒并收取病毒上清。所獲慢病毒顆粒感染人乳腺癌細胞MCF-7,QPCR方法檢測兩種干擾載體對BCSC-1基因的抑制效率。結(jié)果 菌落PCR結(jié)果顯示目的片段插入PLKO.1-sp6-pgk-GFP載體,DNA測序證實插入序列無誤。QPCR結(jié)果顯示兩種干擾載體感染人乳腺癌細胞MCF-7后,BCSC-1 shRNA1組和BCSC-1 shRNA2組BCSC-1基因表達水平分別為0.34±0.046和0.63±0.043,較空白對照組和NS組均有明顯下降(P0.05),且BCSC-1 shRNA1抑制效果優(yōu)于BCSC-1 shRNA2(P0.05)。結(jié)論 成功構(gòu)建了兩種BCSC-1基因慢病毒干擾載體,兩載體均能下調(diào)人乳腺癌細胞MCF-7中BCSC-1基因表達水平。
【作者單位】： 濰坊醫(yī)學院免疫學教研室;
【基金】：山東省自然科學基金項目(課題編號:2009CM019)
【分類號】：R392
【正文快照】： 乳腺癌候選抑制蛋白-1(Breast cancer suppressor candidate 1,BCSC-1)基因位于人類染色體llq23~ q24。多種腫瘤細胞轉(zhuǎn)染BCSC-1基因后,腫瘤細胞的 體內(nèi)外惡性生物學行為,如體內(nèi)外增殖能力、轉(zhuǎn)移能 力、成瘤性等均明顯下降[1—3],803(:-1基因可能為一個新的重要抑癌基因。本研

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1 袁芳;鞠吉雨;唐媛媛;邸大琳;王麗娜;孫萍;;BCSC-1基因異位表達對人小細胞肺癌細胞增殖的抑制效應(yīng)[J];中國癌癥雜志;2012年05期

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本文編號：1196918