EV71亞單位VP1的原核表達(dá)、純化及免疫原性分析
發(fā)布時(shí)間:2017-11-16 20:16
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【摘要】:目的原核表達(dá)并純化人腸道病毒71型(EV71)亞單位VP1蛋白,分析其免疫原性。方法采用PCR技術(shù)擴(kuò)增EV71 VP1(AB204852.1)基因序列,構(gòu)建重組質(zhì)粒p ET32a(+)-VP1并轉(zhuǎn)化E.coli BL21(DE3),IPTG誘導(dǎo)表達(dá)6×His-VP1融合蛋白,將表達(dá)的蛋白用Ni2+-NTA樹脂純化、TGE液復(fù)性后免疫新西蘭大白兔,制備抗VP1的抗血清,用間接ELISA法檢測(cè)抗血清效價(jià)。結(jié)果重組工程菌p ET32a(+)-VP1/BL21(DE3)高效表達(dá)了相對(duì)分子質(zhì)量約為42 k D的VP1融合蛋白,蛋白經(jīng)純化復(fù)性后免疫新西蘭大白兔所得抗血清效價(jià)大于1,
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