本文關(guān)鍵詞：基于A1E3及B1C4單克隆抗體檢測(cè)日本血吸蟲循環(huán)抗原ELISA法的建立及現(xiàn)場(chǎng)初步應(yīng)用

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【摘要】：目的建立基于A1E3及B1C4單克隆抗體檢測(cè)日本血吸蟲循環(huán)抗原的夾心酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA),并對(duì)其應(yīng)用情況進(jìn)行初步評(píng)價(jià)。方法采用十二烷基磺酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)和免疫印跡試驗(yàn)(Western blotting)對(duì)A1E3及B1C4單克隆抗體進(jìn)行特性分析,用ELISA法測(cè)定B1C4、A1E3單克隆抗體效價(jià)。采用棋盤格滴定法確定雙單抗夾心ELISA法檢測(cè)循環(huán)抗原的最佳工作濃度。在最佳條件下,分別檢測(cè)20份急性血吸蟲病病人血清、46份慢性血吸蟲病病人血清及20份正常人血清,評(píng)價(jià)其檢測(cè)敏感性和特異性。用建立的雙單抗夾心ELISA法和市售檢測(cè)血吸蟲循環(huán)抗原的ELISA試劑盒檢測(cè)湖北省江陵縣IHA陽性血吸蟲病病人血清72份,以評(píng)估雙單抗夾心ELISA法的檢測(cè)效能。結(jié)果經(jīng)SDS-PAGE和Western blotting分析,純化后的A1E3及B1C4在相對(duì)分子質(zhì)量(Mr)88 000和52 000處各有一條清晰重鏈,在Mr20 000處有一條相同的輕鏈,且A1E3及B1C4可與可溶性蟲卵抗原(SEA)及急性血吸蟲病病人血清發(fā)生特異性反應(yīng)。B1C4單抗效價(jià)可達(dá)1∶105,A1E3單抗效價(jià)可達(dá)1∶30 000。用B1C4、A1E3雙單抗夾心ELISA法檢測(cè)急、慢性血吸蟲病病人血清陽性率分別為100%和86.9%,檢測(cè)20份正常人血清特異性為100%。雙單抗夾心ELISA法及市售ELISA試劑盒檢測(cè)日本血吸蟲循環(huán)抗原陽性率分別為45.8%及43.1%。結(jié)論成功建立了基于A1E3及B1C4雙單抗夾心ELISA法,該法檢測(cè)日本血吸蟲循環(huán)抗原具有較高的敏感性及特異性。
【作者單位】： 中國(guó)疾病預(yù)防控制中心寄生蟲病預(yù)防控制所 衛(wèi)生部寄生蟲病原與媒介生物學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 世界衛(wèi)生組織瘧疾、血吸蟲病和絲蟲病合作中心;
【基金】：國(guó)家重大科技專項(xiàng)(2008ZX10004011、2012ZX10004220)
【分類號(hào)】：R383.24
【正文快照】： 循環(huán)抗原是血吸蟲在宿主體內(nèi)寄生的代謝產(chǎn)物中具有抗原性的大分子物質(zhì)[1]。近年來,大量研究闡明了血吸蟲循環(huán)抗原的主要成分、理化性質(zhì)及代謝途徑,表明了檢出循環(huán)抗原是血吸蟲活蟲寄生的標(biāo)志。因此,血吸蟲循環(huán)抗原檢測(cè)具有診斷及考核療效的價(jià)值,是一種具有病原學(xué)意義的免疫診

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