本文關(guān)鍵詞：乙型腦炎病毒PrM蛋白原核表達及單克隆抗體制備

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【摘要】：目的表達和純化乙型腦炎病毒Pr M基因的融合蛋白,制備Pr M融合蛋白的鼠源性單克隆抗體(p Ab)。方法根據(jù)Gen Bank數(shù)據(jù)庫中乙型腦炎病毒Pr M氨基酸序列獲得其對應(yīng)的基因序列,對Pr M全長基因(80 aa)進行體外合成,將其克隆至p ET-21原核表達載體,構(gòu)建重組表達質(zhì)粒p ET21-Pr M;將陽性重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化大腸桿菌,IPTG誘導(dǎo)表達融合蛋白,通過鎳離子親和層析純化目的蛋白;純化蛋白免疫BALB/c小鼠,獲取單克隆抗體并利用Protein A Sepharose柱進行純化,ELISA法檢測抗體效價,Western blot法檢測抗體特異性。結(jié)果成功構(gòu)建了p ET-21-Pr M原核表達載體,0.5 mmol/L PTG 30℃培養(yǎng)6 h,原核蛋白Pr M蛋白以包涵體形式在大腸桿菌得到高水平表達,通過復(fù)性與親和層析獲得純度在90%以上的Pr M蛋白,蛋白濃度為600 mg/L,制備的抗Pr M單抗效價高達1:1.6×106,Western blot鑒定其具有良好的特異性。結(jié)論獲得高純度乙型腦炎病毒Pr M蛋白,并制備特異性單克隆抗體,將為進一步研究乙型腦炎病毒的生物學(xué)功能提供實驗基礎(chǔ)。
【作者單位】： 湖南省人民醫(yī)院檢驗科;湖南省疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：湖南省科學(xué)技術(shù)廳科研條件創(chuàng)新專項項目(No:2011TT2046)
【分類號】：R373
【正文快照】： 乙腦(Japanese encephalitis,JE)是由日本乙型腦炎病毒(Japanese encephalitis virus,JEV)經(jīng)蚊蟲傳播引起人或動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染的急性傳染病,病死率在10%以上。我國發(fā)患者數(shù)占世界總發(fā)患者數(shù)的80%,幸存者約15.3%,有不同程度的腦膜炎后遺癥[1]。近年來,其流行范圍有不斷擴

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【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

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本文編號：1184950