本文關鍵詞：剛地弓形蟲自噬相關蛋白3基因的克隆表達與多抗制備

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【摘要】：目的克隆、表達剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)自噬相關蛋白3(Tg Atg3)基因,并制備能特異性識別該蛋白的多克隆抗體。方法以弓形蟲RH株c DNA為模板,構建p ET28a-Tg Atg3重組質粒,轉化入大腸埃希菌(E.coli)Rosetta感受態(tài)細胞,經(jīng)自誘導培養(yǎng)基誘導表達,用鎳柱親和層析法純化誘導表達產(chǎn)物,以小鼠抗His標簽單克隆抗體作為一抗,蛋白質印跡(Western blotting)進行鑒定。以純化的Tg Atg3蛋白作為抗原皮下多點注射免疫日本大耳白兔,125μg/(只·次),免疫4次后心臟取血,制備血清,獲得特異性抗Tg Atg3多克隆抗體。對制備的多克隆抗體進行Western blotting與間接免疫熒光法(IFA)鑒定。結果雙酶切、PCR擴增及測序結果證實目的片段序列正確,原核表達質粒p ET28a-Tg Atg3構建成功。SDS-PAGE和Western blotting結果表明,重組E.coli中可見相對分子質量(Mr)約44 000的可溶性Tg Atg3蛋白的高效表達�？贵w檢測Western blotting結果顯示,制備的多克隆抗體能特異性識別弓形蟲RH株的Tg Atg3蛋白。IFA結果顯示,該多克隆抗體可與蟲體胞漿內Tg Atg3結合。結論獲得重組可溶性Tg Atg3蛋白,制備的多克隆抗體能特異性識別弓形蟲RH株的天然Atg3蛋白。
【作者單位】： 東陽市人民醫(yī)院檢驗科;溫州醫(yī)科大學基礎醫(yī)學院;溫州醫(yī)科大學第一臨床醫(yī)學院;溫州醫(yī)科大學生命科學學院檢驗醫(yī)學院;
【基金】：浙江省自然科學基金(No.LY12H19004,LQ14H190003) 浙江省科技廳公益性項目(No.2014C33161) 浙江省新苗人才計劃(No.2014R413082)~~
【分類號】：R382.5
【正文快照】： (1 Clinical Laboratory,Dongyang People’s Hospital,Jinhua 322100,China;2 School of Basic MedicalSciences,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;3 The First Clinical Medical College,Wenzhou Medical University,Wenzhou 325035,China;4 School of Medi

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3 鄒s舠，

本文編號：1181914