本文關(guān)鍵詞：結(jié)核分枝桿菌rHpsX-MPT64融合蛋白的制備與臨床應(yīng)用

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【摘要】：目的構(gòu)建結(jié)核分枝桿菌融合基因hpsX-mpt64原核表達系統(tǒng),建立基于rHpsX-MPT64為包被抗原酶聯(lián)免疫吸附測定法(Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)并對其用于結(jié)核患者血清學(xué)診斷的敏感性和特異性進行評價。方法PCR擴增并克隆結(jié)核分枝桿菌hpsX和mpt64基因,以連接引物PCR構(gòu)建hpsX-mpt64人工融合基因,建立上述目的基因原核表達系統(tǒng)。采用SDS-PAGE檢測目的重組蛋白rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表達情況,Ni-NTA親和層析法提純上述目的重組蛋白,Western Blot檢測其免疫性。分別以rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64為包被抗原,建立相應(yīng)ELISA檢測150例健康人群、73例非結(jié)核肺部疾病患者和277例活動性肺結(jié)核患者血清標本中抗體。結(jié)果克隆的hpsX和mpt64及構(gòu)建的hpsX-mpt64融合基因與GenBank中相關(guān)序列相似性為100%。rHpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64表達量分別為細菌總蛋白的20.3%、28.5%和26.5%,其提純物電泳后均顯示單一條帶�；趓HpsX、rMPT64和rHpsX-MPT64為包被抗原的ELISA對涂陽患者血清抗體檢出率明顯高于涂陰患者(P0.01),檢測活動性結(jié)核患者血清抗體的敏感性分別為59.2%、61.4%和74.4%,特異性分別為90.6%、83.9%和91.0%,rHpsX-MPT64為包被抗原敏感性明顯高于rHpsX和rMPT64抗原(P0.01)。結(jié)論基于rHpsX-MPT64為包被抗原的ELISA有較高的敏感性和特異性,重組融合蛋白為抗原有助于進一步提高檢測結(jié)核病血清學(xué)診斷的敏感性。
【作者單位】： 浙江省中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院;浙江醫(yī)學(xué)高等�？茖W(xué)校;
【基金】：浙江醫(yī)學(xué)高等專科學(xué)校博士基金項目(No.2013B06)~~
【分類號】：R378.91
【正文快照】： 結(jié)核病已成為當前嚴重危害人類健康的公共衛(wèi)生問題[1]。簡便、快速而準確的實驗室診斷對病人及時、有效的治療至關(guān)重要[2]。細菌學(xué)檢查目前仍是結(jié)核病診斷的金標準,但涂片陽性率低、培養(yǎng)所需時間太長,不能滿足臨床快速診治需要,因此迫切需要開展快速、高靈敏度的的檢測技術(shù)[2]

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本文編號：1177381