本文關(guān)鍵詞：高致病性2型豬鏈球菌截短型類枯草桿菌絲氨酸蛋白酶基因的鑒定和功能研究

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【摘要】：【目的】克隆表達高致病性2型豬鏈球菌05ZYH33株的SspA截短型基因,驗證其是否具有酶學(xué)活性,并構(gòu)建該基因的缺失突變株細菌,探討其在2型豬鏈球菌致病過程中所起的作用【。方法】構(gòu)建SS2的SspA截短型基因05SSU0811原核表達質(zhì)粒,表達并純化05SSU0811蛋白,運用絲氨酸蛋白酶底物Succinyl-Ala-Ala-Pro-Phe-p-nitroanilide(pNa),通過顯色反應(yīng)檢測表達產(chǎn)物的酶學(xué)活性;運用同源重組技術(shù)敲除05SSU0811基因,多重交叉PCR篩選敲除株并測序鑒定,動物試驗分析05SSU0811基因缺失對細菌毒力的影響�！窘Y(jié)果】成功表達并純化05SSU0811蛋白,濃度約為3.5 g/L。絲氨酸蛋白酶活性測定試驗證實其具有酶學(xué)活性;獲得05SSU0811基因缺失突變株,小鼠攻毒試驗表明,野生株攻毒的20只小鼠全部死亡,基因缺失突變株攻毒組死亡9只,死亡率45%,兩組間死亡率有顯著性差異。表明05SSU0811基因缺失的菌株毒力較野生株明顯下降�！窘Y(jié)論】05SSU0811基因編碼的截短型絲氨酸蛋白酶仍然具有酶學(xué)活性,SS2的截短型基因SspA在高致病性2型豬鏈球菌的致病性方面具有一定作用。
【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學(xué)基礎(chǔ)部微生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金青年科學(xué)基金項目(No.81301398) 全軍醫(yī)學(xué)科技青年培育項目(No.13QNP106)
【分類號】：R378;S852.61
【正文快照】： 絲氨酸蛋白酶是一類以絲氨酸為活性中心的蛋白水解酶,主要分為6個蛋白超家族,其中類胰蛋白酶和類枯草桿菌蛋白酶是其最主要的成員。類枯草桿菌蛋白酶屬于絲氨酸蛋白酶S8家族,廣泛存在于細菌、真菌和寄生蟲等病原生物中[1-3]。在細菌中,類枯草桿菌絲氨酸蛋白酶(Surface-associa

【共引文獻】

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