本文關(guān)鍵詞：直接免疫熒光法檢測(cè)狂犬病病毒滴度條件的優(yōu)化及驗(yàn)證

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【摘要】：目的對(duì)直接免疫熒光法檢測(cè)狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的條件進(jìn)行優(yōu)化及驗(yàn)證。方法考察直接免疫熒光法中細(xì)胞不同接種方式(分步接種法、一步接種法)、病毒不同培養(yǎng)溫度(34、37℃)及培養(yǎng)時(shí)間(6、12、24、48、72、96 h)對(duì)狂犬病病毒滴度的影響;對(duì)優(yōu)化的方法進(jìn)行試驗(yàn)間精密性和特異性驗(yàn)證,并與小鼠腦內(nèi)滴定法的檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果選擇一步接種法作為直接免疫熒光法的細(xì)胞接種方式;34℃作為病毒培養(yǎng)溫度;病毒培養(yǎng)至96 h時(shí)進(jìn)行染色,判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果;病毒培養(yǎng)至第3天時(shí)進(jìn)行熒光灶計(jì)數(shù),計(jì)算病毒液中病毒的數(shù)量。兩名操作人員12次檢測(cè)結(jié)果的變異系數(shù)僅為0.05%;用該方法檢測(cè)不同病毒,僅狂犬病病毒組出現(xiàn)特異性熒光,而犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒組未觀察到熒光灶。采用直接免疫熒光法和小鼠腦內(nèi)滴定法檢測(cè)狂犬病病毒樣品的病毒滴度結(jié)果差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),具有較好的一致性。結(jié)論優(yōu)化的直接免疫熒光法精密性良好,特異性強(qiáng),操作簡(jiǎn)便,檢測(cè)周期短,可用于狂犬病病毒滴度的定量檢測(cè)。
【作者單位】： 長(zhǎng)春百克生物科技股份公司;吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院艾滋病疫苗國(guó)家工程實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國(guó)家科技部十二五重大科技專項(xiàng)(2012ZX10001-009)
【分類號(hào)】：R373.9;R392-33
【正文快照】： 在狂犬病疫苗生產(chǎn)及研究中,國(guó)內(nèi)一直沿用小鼠法測(cè)定狂犬病病毒(rabies virus,RV)培養(yǎng)液感染性滴度,由于該方法檢測(cè)周期長(zhǎng),操作復(fù)雜,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體差異大,人為干擾因素較多,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性欠佳,因此,建立一種簡(jiǎn)便、有效、重復(fù)性好的體外檢測(cè)方法十分必要。免疫熒光法由Goldwasser于1

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