本文關(guān)鍵詞：直接免疫熒光法檢測狂犬病病毒滴度條件的優(yōu)化及驗(yàn)證

  更多相關(guān)文章： 狂犬病病毒 直接免疫熒光法 病毒滴度

【摘要】：目的對直接免疫熒光法檢測狂犬病病毒(rabies virus,RV)滴度的條件進(jìn)行優(yōu)化及驗(yàn)證。方法考察直接免疫熒光法中細(xì)胞不同接種方式(分步接種法、一步接種法)、病毒不同培養(yǎng)溫度(34、37℃)及培養(yǎng)時(shí)間(6、12、24、48、72、96 h)對狂犬病病毒滴度的影響;對優(yōu)化的方法進(jìn)行試驗(yàn)間精密性和特異性驗(yàn)證,并與小鼠腦內(nèi)滴定法的檢測結(jié)果進(jìn)行比較。結(jié)果選擇一步接種法作為直接免疫熒光法的細(xì)胞接種方式;34℃作為病毒培養(yǎng)溫度;病毒培養(yǎng)至96 h時(shí)進(jìn)行染色,判定實(shí)驗(yàn)結(jié)果;病毒培養(yǎng)至第3天時(shí)進(jìn)行熒光灶計(jì)數(shù),計(jì)算病毒液中病毒的數(shù)量。兩名操作人員12次檢測結(jié)果的變異系數(shù)僅為0.05%;用該方法檢測不同病毒,僅狂犬病病毒組出現(xiàn)特異性熒光,而犬瘟熱病毒和犬細(xì)小病毒組未觀察到熒光灶。采用直接免疫熒光法和小鼠腦內(nèi)滴定法檢測狂犬病病毒樣品的病毒滴度結(jié)果差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),具有較好的一致性。結(jié)論優(yōu)化的直接免疫熒光法精密性良好,特異性強(qiáng),操作簡便,檢測周期短,可用于狂犬病病毒滴度的定量檢測。
【作者單位】： 長春百克生物科技股份公司;吉林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院艾滋病疫苗國家工程實(shí)驗(yàn)室;
【基金】：國家科技部十二五重大科技專項(xiàng)(2012ZX10001-009)
【分類號】：R373.9;R392-33
【正文快照】： 在狂犬病疫苗生產(chǎn)及研究中,國內(nèi)一直沿用小鼠法測定狂犬病病毒(rabies virus,RV)培養(yǎng)液感染性滴度,由于該方法檢測周期長,操作復(fù)雜,實(shí)驗(yàn)動(dòng)物個(gè)體差異大,人為干擾因素較多,實(shí)驗(yàn)重復(fù)性欠佳,因此,建立一種簡便、有效、重復(fù)性好的體外檢測方法十分必要。免疫熒光法由Goldwasser于1

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 周康鳳;姜立民;黃海鷹;毛子安;陳秋紅;;間接免疫熒光技術(shù)檢測狂犬病毒感染性滴度的可行性研究[J];國際流行病學(xué)傳染病學(xué)雜志;2006年06期

2 顧兵;張政;李玉萍;余日躍;王心如;;半數(shù)致死量及其計(jì)算方法概述[J];中國職業(yè)醫(yī)學(xué);2009年06期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李翠萍;吳民耀;王宏元;;3種半數(shù)致死濃度計(jì)算方法之比較[J];動(dòng)物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2012年09期

2 李干洲;汪德生;徐景峨;王璇;余波;楊粵黔;;貴州省鵝源1型鴨疫里默氏桿菌的分離鑒定與致病性研究[J];貴州畜牧獸醫(yī);2013年02期

3 李f ;邊輝;張燁軒;邵貝貝;謝曉林;;牛蒡抗蟲活性及抗蟲成分的初步研究[J];氨基酸和生物資源;2013年03期

4 魏婕;王旭裕;王向輝;林強(qiáng);王愛民;楊建新;;苯并異噻唑啉酮甲酸酯類衍生物的海洋防污性能研究[J];海南大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2014年02期

5 徐建芬;唐訪良;陳峰;阮東德;張明;;典型行業(yè)廢水特征有機(jī)污染物排放控制標(biāo)準(zhǔn)探討[J];環(huán)境監(jiān)測管理與技術(shù);2014年04期

6 宋佳蕾;繩秀珍;戰(zhàn)文斌;;免疫細(xì)胞化學(xué)法測定魚類淋巴囊腫病毒(LCDV)滴度[J];中國海洋大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2012年05期

7 魏婕;王旭裕;陳華勇;王向輝;林強(qiáng);王愛民;楊建新;;1,2-苯并異噻唑啉-3-酮-2-甲酸苯酯類化合物的合成及防污性能研究[J];涂料工業(yè);2014年09期

8 王萌;嚴(yán)作廷;葉得河;王東升;張仕棟;于遠(yuǎn)光;張愛文;陳炅然;;自擬中藥方劑對雞傳染性支氣管炎的防治效果[J];西北農(nóng)林科技大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2011年12期

9 王小蘭;胡青海;童永亮;韓先干;丁鏟;于圣青;;血清1型鴨疫里默氏桿菌滅活油乳劑疫苗的研制[J];中國預(yù)防獸醫(yī)學(xué)報(bào);2012年04期

10 王小蘭;胡青海;韓先干;丁鏟;于圣青;;血清2型鴨疫里默氏桿菌制苗用菌株的篩選及滅活油乳劑疫苗的研制[J];中國動(dòng)物傳染病學(xué)報(bào);2012年01期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 龐龍;路浩;趙寶玉;張j;宋巖巖;王姍姍;趙一楠;;苦馬豆素對新生SD大鼠大腦皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)學(xué)損傷作用的研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會家畜內(nèi)科學(xué)分會第七屆代表大會暨學(xué)術(shù)研討會論文集（下冊）[C];2011年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 李鵬;副豬嗜血桿菌分子流行病學(xué)及其OMP-P2基因抗原性與檢測技術(shù)研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

2 胡楠;甜葉懸鉤子苷的分離純化及功能研究[D];湖南農(nóng)業(yè)大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 張麗俏;基于日本青溕急性毒性實(shí)驗(yàn)的水質(zhì)監(jiān)測技術(shù)構(gòu)建[D];山東師范大學(xué);2011年

2 楊永珍;不同株雞源志賀菌的生物學(xué)特性及致病性研究[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

3 趙耀;幾種重要細(xì)菌毒素參考品候選物的制備研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

4 呂俊超;養(yǎng)殖大菱鲆病原菌的分離鑒定、組織病理學(xué)及免疫組織化學(xué)[D];中國海洋大學(xué);2008年

5 王愛華;邵陽市1998～2007年狂犬病的流行病學(xué)研究[D];中南大學(xué);2009年

6 王立輝;丙烯酸甲酯對小鼠肺組織炎性損傷及脂質(zhì)過氧化損傷的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2010年

7 楊紅玉;檢測隱孢子蟲卵囊的單抗介導(dǎo)IFA和夾心ELISA方法的建立及初步應(yīng)用[D];河南農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

8 季寶芳;肝癌靶向的阿霉素—脂質(zhì)—聚陽離子-DNA復(fù)合物的制備及體內(nèi)評價(jià)[D];鄭州大學(xué);2012年

9 王小蘭;鴨疫里默氏桿菌病多價(jià)油乳劑滅活疫苗的研制[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2012年

10 潘帥奇;紫杉醇mPEG-PLA共聚物膠束治療腦膠質(zhì)瘤的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

【二級參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 趙斌;葛金芳;朱娟娟;黃曉暉;李俊;;小議在MTT法測細(xì)胞增殖抑制率中IC_(50)的計(jì)算方法[J];安徽醫(yī)藥;2007年09期

2 鐘以禧;;半數(shù)致死量的區(qū)間估計(jì)[J];北京第二醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);1984年01期

3 章元明,曾子建,張躍;半數(shù)致死量LD_(50)的百分偏差和漸近方差[J];生物數(shù)學(xué)學(xué)報(bào);1999年01期

4 肖經(jīng)緯;崔濤;孟會林;李忠生;李斌;王海華;;3種急性經(jīng)口毒性試驗(yàn)方法的比較[J];毒理學(xué)雜志;2007年02期

5 楊世洪;半數(shù)致死量LD50速算方法[J];衛(wèi)生研究;1974年05期

6 李佳;金晶;黃芝瑛;;上下法在急性毒性試驗(yàn)中的應(yīng)用進(jìn)展[J];中國比較醫(yī)學(xué)雜志;2008年06期

7 徐葛林;國內(nèi)外狂犬病毒實(shí)驗(yàn)室檢測與診斷技術(shù)的研究及進(jìn)展[J];中國計(jì)劃免疫;2005年02期

8 張學(xué)松;;計(jì)算半數(shù)致死量的新方法[J];中國家禽;1994年06期

9 洪淵，，杜泳銘;用線性回歸法來計(jì)算半數(shù)致死量──兼與“計(jì)算半數(shù)致死量的新方法”一文商榷[J];中國家禽;1995年04期

10 劉玉秀;;半數(shù)致死量的廣義線性模型估計(jì)方法[J];中國衛(wèi)生統(tǒng)計(jì);1995年05期

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 孔梅;邢長永;王鶯;;直接免疫熒光法與多重逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)對呼吸道感染常見病毒的診斷價(jià)值[J];中華醫(yī)院感染學(xué)雜志;2012年23期

2 謝敬,周富道,洪華;直接免疫熒光法檢測泌尿生殖道衣原體[J];重慶醫(yī)學(xué);1994年02期

3 王登科;單克隆抗體直接免疫熒光法快速診斷水痘-帶狀皰疹病毒感染[J];國外醫(yī)學(xué).預(yù)防.診斷.治療用生物制品分冊;1990年06期

4 談小榮;褚曉明;張建斌;;直接免疫熒光法檢測狂犬病毒滴度的可行性研究[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展;2011年02期

5 何霞輝;;直接免疫熒光法病毒抗原測定在呼吸道感染性疾病中的診斷應(yīng)用[J];中國實(shí)用醫(yī)藥;2014年19期

6 林麟;;直接免疫熒光法診斷大皰性類天皰瘡:皮損范圍和部位的影響[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1989年06期

7 ;應(yīng)用細(xì)胞離心增敏的直接免疫熒光法檢測臨床標(biāo)本中的單純皰疹病霉[J];國外醫(yī)學(xué).臨床生物化學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)分冊;1997年06期

8 王宏偉,王家璧,劉躍華,王曉峰,鄭占才;聚合酶鏈反應(yīng)和直接免疫熒光法檢測沙眼衣原體感染的方法比較[J];中華皮膚科雜志;1997年03期

9 俞小衛(wèi);王亞楠;程寶金;馬玲娣;;直接免疫熒光法病毒抗原測定在呼吸道感染性疾病診斷中的應(yīng)用[J];檢驗(yàn)醫(yī)學(xué);2013年01期

10 林志雄,黃引賢,李樹根,李力復(fù),童昆周;應(yīng)用直接免疫熒光法檢測豬流行性腹瀉病毒的研究[J];中國進(jìn)出境動(dòng)植檢;1997年02期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 邱紅;江淑芳;李中浪;;直接免疫熒光法對多種呼吸道病毒的檢測的臨床意義[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會議資料匯編[C];2008年

本文編號：1169454