本文關(guān)鍵詞：穩(wěn)定表達CRFR1的HEK293細胞株建立與功能鑒定

  更多相關(guān)文章： 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子 CRFR HEK細胞 轉(zhuǎn)染 cAMP G蛋白偶聯(lián)受體

【摘要】：目的建立穩(wěn)定表達CRFR1的HEK293細胞株,并鑒定cAMP評價體系構(gòu)建是否成功。方法采用Lipofectamine2000將CRFR1質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至HEK293細胞中,經(jīng)G418篩選單克隆陽性細胞,采用Western blot技術(shù)、RT-PCR法、免疫熒光法證實穩(wěn)定表達CRFR1細胞株構(gòu)建成功。并用CRF刺激穩(wěn)定表達CRFR1的HEK293細胞株,繪制CRF刺激HEK293-CRFR1細胞釋放cAMP的量效曲線。結(jié)果 Western blot、RT-PCR、免疫熒光結(jié)果表明,CRFR1受體在HEK293細胞系中成功表達。cAMP釋放量效實驗顯示,CRF刺激HEK293-CRFR1細胞釋放cAMP的EC50為(5.64±0.05)×10-10mol·L-1。結(jié)論成功建立了穩(wěn)定表達CRFR1的HEK293細胞株,并且cAMP含量評價體系構(gòu)建成功,為研究CRFR1的生物學(xué)功能及篩選CRFR1受體靶向藥物奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 中南大學(xué)藥學(xué)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院毒物藥物研究所;
【基金】：國家科技部“重大新藥創(chuàng)制”科技重大專項(No2012ZX09301003-001) 國家自然科學(xué)基金資助項目(No31350001)
【分類號】：R329.2
【正文快照】： 促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子(corticotropin re-leasing factor,CRF)是由41個氨基酸組成的多肽,是應(yīng)激條件下的主要神經(jīng)遞質(zhì),在下丘腦室旁核表達量較高,并在邊緣結(jié)構(gòu)廣泛分布[1]。CRF負責(zé)調(diào)節(jié)自主神經(jīng)、免疫、生理等與應(yīng)激相關(guān)的反應(yīng)。CRF主要是通過與其受體結(jié)合來發(fā)揮作用,CRF

【相似文獻】

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊甲芳;陳學(xué)群;陳曉澄;杜繼曾;;青藏高原小哺乳動物CRFR1α型受體克隆及受體特性[A];中國生理學(xué)會第23屆全國會員代表大會暨生理學(xué)學(xué)術(shù)大會論文摘要文集[C];2010年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 楊甲芳;青藏高原三種小哺乳動物CRFR1α的研究[D];浙江大學(xué);2011年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 元媛;低氧調(diào)節(jié)大鼠CRFR1受體細胞內(nèi)信號通路[D];浙江大學(xué);2012年

，

本文編號：1139642