本文關(guān)鍵詞：剛地弓形蟲MIC8 CTD作用蛋白的篩選及鑒定

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【摘要】：目的從剛地弓形蟲速殖子裂解液中篩選并鑒定微線體蛋白8羧基端胞質(zhì)尾(MIC8CTD)的作用蛋白。方法分別以GST-MIC8CTD蛋白和GST蛋白(對(duì)照)作為探針蛋白,采用GST pull-down技術(shù)從弓形蟲裂解液中篩選目標(biāo)蛋白并進(jìn)行SDS-PAGE分析;將目標(biāo)蛋白轉(zhuǎn)印至PVDF膜,測(cè)序,通過BLAST2在線對(duì)比搜索相似蛋白序列,初步確定目標(biāo)蛋白;以目標(biāo)蛋白抗體為一抗進(jìn)行Western blot,分析GST pull-down產(chǎn)物與目標(biāo)蛋白抗體的相互作用;分別用GSTMIC8CTD多克隆抗體和兔免疫前血清結(jié)合的sepharose與弓形蟲裂解液進(jìn)行免疫共沉淀試驗(yàn),沉淀物進(jìn)行SDS-PAGE和Western blot分析。結(jié)果 PAGE顯示GST-MIC8CTD蛋白的pull-down產(chǎn)物中有一蛋白條帶(分子質(zhì)量單位約35~45ku),GST蛋白的pull-down產(chǎn)物中無(wú)此蛋白;BLAST2比對(duì)目標(biāo)蛋白的氨基酸序列與弓形蟲醛縮酶序列一致;ECM檢測(cè)GST-MIC8CTD多克隆抗體的免疫共沉淀產(chǎn)物中有蛋白組分可被相應(yīng)的抗體識(shí)別,免疫前血清的免疫共沉淀產(chǎn)物中無(wú)可被識(shí)別的蛋白。結(jié)論經(jīng)GST pull-down技術(shù)和免疫共沉淀試驗(yàn)篩選、鑒定,弓形蟲MIC8CTD的作用蛋白為醛縮酶。
【作者單位】： 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院藥理學(xué)教研室;中山大學(xué)中山醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;
【基金】：河南省科技攻關(guān)計(jì)劃項(xiàng)目(No.112102310209) 河南省教育廳自然科學(xué)研究項(xiàng)目(No.2012B310019) 新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院博士科研啟動(dòng)基金項(xiàng)目(No.2010)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)簡(jiǎn)稱弓形蟲,為專性細(xì)胞內(nèi)寄生原蟲,可入侵多種動(dòng)物的有核細(xì)胞,導(dǎo)致弓形蟲感染或弓形蟲病。在美國(guó)和法國(guó),弓形蟲已成為繼沙門氏菌(Salmonella)和李斯特菌(Liste-***ria)后第3大食源性致死性病原體[1]。微線體蛋白(microneme protein,MIC)在蟲體入

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1136691