本文關(guān)鍵詞：慢病毒介導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)染對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表型、增殖和分化能力的影響

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【摘要】：運(yùn)用慢病毒(Lentivirus)載體構(gòu)建綠色熒光蛋白(GFP)在小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)中的轉(zhuǎn)染體系,檢測(cè)轉(zhuǎn)染后MSCs的表型和增殖能力,并誘導(dǎo)其向成肌細(xì)胞分化,檢測(cè)此轉(zhuǎn)染體系對(duì)MSCs細(xì)胞表型、增殖和分化能力的影響.骨髓細(xì)胞懸液破紅后貼壁法培養(yǎng)MSCs,采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定細(xì)胞表面標(biāo)記,鑒定MSCs純度;Lentivirus-GFP以1、10、50和100的感染復(fù)數(shù)(MOI)轉(zhuǎn)染MSCs,作用48h后流式細(xì)胞術(shù)及免疫熒光法檢測(cè)轉(zhuǎn)染效率和表達(dá)的熒光強(qiáng)度;MTT法檢測(cè)轉(zhuǎn)染后MSCs的細(xì)胞活力.誘導(dǎo)MSCs-GFP向成肌細(xì)胞分化,蛋白印記法(WB)檢測(cè)成肌細(xì)胞特異性蛋白desmin和α-SMA的表達(dá).流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示,培養(yǎng)的MSCs表達(dá)CD44、CD90和CD105,不表達(dá)CD34、CD45和CD188,符合干細(xì)胞特性.MOI為1、10、50和100的轉(zhuǎn)染效率分別為23.45%、93.51%、95.44%和95.55%,MOI為10時(shí),轉(zhuǎn)染效率較高,且對(duì)MSCs活力無明顯影響.MSCs-GFP體外經(jīng)成肌細(xì)胞誘導(dǎo)分化后,表達(dá)特異性抗原desmin和α-SMA.表明本研究成功構(gòu)建了小鼠骨髓來源MSCs的Lentivirus-GFP轉(zhuǎn)染體系,有效標(biāo)記了MSCs細(xì)胞,且此標(biāo)記對(duì)MSCs的表型、增殖和分化能力等細(xì)胞生物學(xué)特性無明顯影響.
【作者單位】： 南京大學(xué)醫(yī)學(xué)院;江蘇省疾病預(yù)防控制中心慢性傳染病防制所;
【關(guān)鍵詞】： 慢病毒(Lentivirus) 綠色熒光蛋白(GFP) 小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs) 轉(zhuǎn)染 組織工程
【基金】：國家自然科學(xué)基金(81301448,81301448,3120040) 江蘇省疾病預(yù)防控制中心重點(diǎn)人才項(xiàng)目(JKRC20110029)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 隨著干細(xì)胞工程學(xué)的發(fā)展,骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mesenchymal stem cells,MSCs)作為一種理想的組織修復(fù)來源,已受到越來越多的關(guān)注[1].MSCs是存在于骨髓中具有多向分化潛能的一類干細(xì)胞,具有低免疫原性和獨(dú)特的免疫調(diào)節(jié)作用,能逃避免疫識(shí)別、抑制免疫應(yīng)答[2],且具有取材簡(jiǎn)便、對(duì)機(jī)

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 夏娟;高靜;熊御云;邱晶;馬瑞;錢進(jìn)軍;;胞質(zhì)和核定位α-突觸核蛋白過表達(dá)對(duì)人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的影響[J];南京大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版);2013年01期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前6條

1 張英才;楊卿;汪國營(yíng);劉劍戎;許世磊;李曉華;程錦濤;張琪;楊揚(yáng);陳規(guī)劃;;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)脂肪肝供肝肝移植大鼠保護(hù)作用的實(shí)驗(yàn)研究[J];中華肝臟外科手術(shù)學(xué)電子雜志;2013年05期

2 孫瑞婷;王華;吳祖澤;;間充質(zhì)干細(xì)胞治療放射性腸損傷研究進(jìn)展[J];中國藥理學(xué)與毒理學(xué)雜志;2013年06期

3 宋方龍;耿銳;湯繼磊;胡翰生;崔維頂;范衛(wèi)民;;自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞關(guān)節(jié)腔注射治療羊骨關(guān)節(jié)炎[J];江蘇醫(yī)藥;2014年08期

4 Wen Zhang;Zhong-Yang Shen;Hong-Li Song;Yang Yang;Ben-Juan Wu;Nan-Nan Fu;Tao Liu;;Protective effect of bone marrow mesenchymal stem cells in intestinal barrier permeability after heterotopic intestinal transplantation[J];World Journal of Gastroenterology;2014年23期

5 周t，

本文編號(hào)：1130872