本文關(guān)鍵詞：轉(zhuǎn)錄因子環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白在紫杉醇誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞周期阻滯中的作用及其機(jī)制

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【摘要】：目的探討轉(zhuǎn)錄因子環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(CREB)在紫杉醇誘導(dǎo)宮頸腺癌HeLa細(xì)胞周期阻滯中的作用及其分子機(jī)制。方法 MTT法確定紫杉醇的最佳濃度和處理時(shí)間;PCR技術(shù)構(gòu)建pCI neo/CREB(PN)重組質(zhì)粒及pCI neo/CREB-M(PM)定點(diǎn)突變質(zhì)粒;流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞周期,Western blotting檢測磷酸化CREB(pCREB)、CREB、cyclins以及CDKs蛋白表達(dá)。結(jié)果紫杉醇抑制HeLa細(xì)胞增殖的有效條件為0.1μmol/L處理24 h。0.1μmol/L紫杉醇誘導(dǎo)G2/M細(xì)胞數(shù)量增加,并呈時(shí)間依賴性;cyclin A表達(dá)量下調(diào),cyclin B1、D1和pCREB表達(dá)量上調(diào)。此外,紫杉醇的處理對(duì)cyclin E、CDK1、CDK2、CDK4和CREB表達(dá)量并無顯著性改變。然而,PM聯(lián)合紫杉醇處理后顯著性地反轉(zhuǎn)了紫杉醇單獨(dú)處理引起的cyclin A下調(diào)、cyclin B1和cyclin D1的上調(diào),并且細(xì)胞周期G2/M期阻滯顯著性減少。結(jié)論轉(zhuǎn)錄因子CREB介導(dǎo)的靶向細(xì)胞周期蛋白表達(dá)在紫杉醇誘導(dǎo)的細(xì)胞周期阻滯過程中扮演重要角色。
【作者單位】： 寧波大學(xué)醫(yī)學(xué)院解剖學(xué)與組織學(xué)胚胎學(xué)系轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 宮頸癌 環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白 細(xì)胞周期 流式細(xì)胞術(shù) 免疫印跡法
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(81372209,81071653) 浙江省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(LY13H160038)
【分類號(hào)】：R329.2
【正文快照】： 核內(nèi)轉(zhuǎn)錄因子環(huán)磷酸腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白(cAMP response element binding protein,CREB)的DNA序列,可調(diào)控靶基因的表達(dá)[1~4]。我們的前期研究結(jié)果表明,cAMP/PKC/MAPK信號(hào)通路調(diào)控CREB的磷酸化水平,進(jìn)而影響凋亡基因Bcl-2的表達(dá)。為了深入研究CREB是否為調(diào)控Bcl-2的關(guān)鍵位點(diǎn),

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