本文關(guān)鍵詞：人永生化表皮細胞HaCaT電轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化

  更多相關(guān)文章： HaCaT 電轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染條件

【摘要】：目的比較不同電轉(zhuǎn)染條件下,人永生化表皮細胞HaCaT的轉(zhuǎn)染效率,探討影響HaCaT電轉(zhuǎn)染率和存活率的主要因素,篩選出HaCaT細胞最佳的電轉(zhuǎn)染條件。方法應(yīng)用電穿孔儀,設(shè)定不同的電壓(180、360、540、720V)、脈沖時間(40、60、80、100、120μs)、脈沖周期(1、2、3、4、5次)和溫度(室溫和4℃)等條件,將質(zhì)粒(pGPU6/GFP/nev)電轉(zhuǎn)染至HaCaT細胞。電轉(zhuǎn)染24h后,熒光鏡下和光鏡下分別計算綠色熒光陽性細胞數(shù)和總細胞數(shù),并隨機取3個視野算平均值,計算電轉(zhuǎn)染率;MTT法檢測電轉(zhuǎn)染后細胞的存活率。結(jié)果當(dāng)HaCaT細胞濃度為1.5×106/mL,pGPU6/GFP/nev質(zhì)粒濃度為2.0μg/mL,HaCaT細胞的最佳電轉(zhuǎn)染條件為540V/60μs/Pulse1/RT,此時細胞生長狀態(tài)最佳,電轉(zhuǎn)染率可達到33.23%,細胞存活率為61.22%。結(jié)論本實驗優(yōu)化了HaCaT細胞電轉(zhuǎn)染的最佳條件,提高了HaCaT細胞電轉(zhuǎn)染效率,為后續(xù)基因功能的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院泌尿外科;西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)院環(huán)境和疾病相關(guān)基因教育部重點實驗室;
【關(guān)鍵詞】： HaCaT 電轉(zhuǎn)染 轉(zhuǎn)染條件
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No.81171953)~~
【分類號】：R329.2
【正文快照】： HaCaT細胞是一種人永生化表皮細胞系,具有表皮基底層細胞的分化特性,與原代角質(zhì)形成細胞相同,遺傳特性穩(wěn)定,不具有腫瘤特性[1]。HaCaT細胞可代替人正常角質(zhì)形成細胞,是皮膚疾病研究中理想的細胞模型,可用于檢測各種藥物和理化因素對人正常角質(zhì)形成細胞的影響,是研究上皮性器質(zhì)

【共引文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 張慶曉;王慧利;孟春花;王鋒;曹少先;;電穿孔法轉(zhuǎn)染豬胎兒成纖維細胞條件優(yōu)化[J];江蘇農(nóng)業(yè)科學(xué);2012年12期

2 徐海明;蔣稼歡;;微流控技術(shù)在細胞轉(zhuǎn)染中的應(yīng)用[J];生物工程學(xué)報;2011年10期

3 夏如民;唐均英;趙雪;郭飛;王建;姚陳果;;納秒級陡脈沖誘導(dǎo)人卵巢癌細胞凋亡及對Fas介導(dǎo)的細胞凋亡通路的影響[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2012年06期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 張秀峰;鴨副黏病毒病診斷與同源疫苗的研制及初步應(yīng)用[D];吉林大學(xué);2013年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 王昀璐;Lux標(biāo)記毒死蜱降解菌β菌株和土壤中定殖動態(tài)研究[D];安徽農(nóng)業(yè)大學(xué);2010年

2 夏如民;納秒級陡脈沖對卵巢癌細胞凋亡的外源性通路影響和治療皮下移植瘤安全性研究[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

3 張慶曉;豬胚胎ZFN敲除技術(shù)體系的探索[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2012年

【相似文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 關(guān)慶東,蘇麗萍,王立新,童德妍,徐煥賓,夏明燦,陳晉,熊思東;體內(nèi)電轉(zhuǎn)染增強基因免疫誘導(dǎo)的HBV特異性體液免疫應(yīng)答[J];中國醫(yī)學(xué)生物技術(shù)應(yīng)用;2003年04期

2 董菊子;趙勇;高福興;齊心亮;楊迎桂;;電轉(zhuǎn)染效率影響因素的探討[J];生物技術(shù)通訊;2006年05期

3 曹善仁;劉慕君;劉雄昊;伍匯慧;鄔玲仟;梁德生;;核糖體基因區(qū)打靶載體電轉(zhuǎn)染肝細胞的孵育條件的優(yōu)化[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年13期

4 谷欣;黎燕;;電轉(zhuǎn)染哺乳類動物細胞DG44-CHO的方法探討[J];生物技術(shù)通訊;2008年01期

5 王君;張振;張玉明;呂苗苗;肖志斌;高昌俊;孫緒德;;大鼠低氧誘導(dǎo)因子-1α基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細胞的實驗研究[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進展;2010年20期

6 郝兵;高嵩;侯治富;;穩(wěn)定表達CD200的U937細胞株的建立[J];中國免疫學(xué)雜志;2007年11期

7 安龍;續(xù)惠云;甕媛媛;商澎;;小鼠骨樣細胞MLO-Y4轉(zhuǎn)染方法的研究[J];生物學(xué)雜志;2010年06期

8 王全楚,馮志華,周永興,聶青和,白雪帆;HCV C-Fc基因轉(zhuǎn)染的小鼠樹突狀細胞促進混合淋巴細胞反應(yīng)的作用[J];細胞與分子免疫學(xué)雜志;2004年03期

9 王海瀾;潘明新;張會迎;安靚;高毅;;胰十二指腸同源框基因-1在骨髓來源nestin陽性細胞的轉(zhuǎn)染及表達[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2007年04期

10 宋永利;陸昕;邱爽;祁英培;華松;蘭杰;何小寧;賀小英;張涌;鄭月茂;;巨噬細胞RAW264.7的培養(yǎng)及電轉(zhuǎn)染條件的優(yōu)化[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2010年09期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 黃芝瑛;梁金強;馮偉成;莫國玉;吳淑儀;;治療型雙質(zhì)粒HBV-DNA疫苗長期毒性試驗——小鼠肌肉注射給藥聯(lián)合電轉(zhuǎn)染[A];中國藥理學(xué)會制藥工業(yè)專業(yè)委員會第十一屆學(xué)術(shù)會議論文摘要匯編[C];2004年

2 宋丹;張穎;黃嘉潞;王曉一;劉慶良;李忠明;;電轉(zhuǎn)染技術(shù)增強結(jié)核病核酸疫苗免疫原性的研究[A];第6次全國微生物學(xué)與免疫學(xué)大會論文摘要匯編[C];2004年

3 魏旭東;范瑞華;E.W Gelfand;;有絲分裂原激酶(MEKK_2)調(diào)節(jié)白細胞介素2生成的研究[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

4 王碩;葉慶;余冰;朱慧芬;張悅;楊敬;邵靜芳;沈關(guān)心;;抗CD71人-鼠嵌合抗體(D2C)的構(gòu)建和表達[A];湖北省暨武漢市免疫學(xué)會第八屆學(xué)術(shù)會議論文集[C];2003年

5 王曉娟;戴國儀;曹利民;朱慧芬;張悅;邵靜芬;楊敬;沈關(guān)心;;Survivin反義核酸促進紫杉醇誘導(dǎo)HL-60細胞凋亡[A];中國免疫學(xué)會第四屆學(xué)術(shù)大會會議議程及論文摘要集[C];2002年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前3條

1 丁曉明;地中海氏擬無枝菌酸菌（Amycolatopsis mediterranei）U-32遺傳操作系統(tǒng)的建立[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2003年

2 成勇;乳蛋白與CMV復(fù)合啟動子驅(qū)動hLF cDNA乳腺特異性表達[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2007年

3 李艷;TRPC離子通道在腦源性神經(jīng)營養(yǎng)因子介導(dǎo)的神經(jīng)元軸突轉(zhuǎn)向過程中的作用[D];中國科學(xué)院研究生院（上海生命科學(xué)研究院）;2005年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 曹善仁;核糖體打靶載體電轉(zhuǎn)染肝細胞條件的優(yōu)化[D];中南大學(xué);2007年

2 符少平;ZafA基因沉默對煙曲霉菌生長、毒力的影響[D];暨南大學(xué);2009年

3 顧峰;特定增強子序列對人乳鐵蛋白基因在山羊乳腺上皮細胞中表達的影響[D];揚州大學(xué);2007年

4 李貴陽;增強子、絕緣子和β-乳球蛋白調(diào)控序列啟動功能基因在山羊乳腺上皮細胞中表達的影響[D];揚州大學(xué);2007年

5 彭勇;低強度瞬態(tài)電磁場導(dǎo)致細胞膜穿孔的研究[D];四川大學(xué);2001年

6 徐冬蘭;BLG/hLF基因轉(zhuǎn)染山羊乳腺上皮細胞及TSA對轉(zhuǎn)染基因表達的影響[D];揚州大學(xué);2008年

7 梁遷;三條造血候選基因的克隆及在骨髓再生過程中作用的篩查[D];上海交通大學(xué);2007年

8 韓雪琳;熱休克蛋白90在HepG2細胞氧化應(yīng)激與適應(yīng)中的作用研究[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2006年

9 譚逵;弓形蟲P24基因敲除質(zhì)粒的構(gòu)建及缺陷型蟲株建立方法的初步研究[D];中南大學(xué);2008年

10 楊艷;肌球蛋白X對神經(jīng)軸突生長的調(diào)控[D];東北師范大學(xué);2009年

，

本文編號：1124839