本文關(guān)鍵詞：miR-142-3p對THP-1細胞釋放炎癥因子的調(diào)控作用

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【摘要】：背景 膿毒癥（sepsis）是指由細菌、病毒及寄生蟲等微生物感染所引起的全身炎癥反應綜合征（SIRS），容易進展為感染性休克及多器官功能衰竭，預后差，病死率高達30%~50%。其發(fā)病機理是微生物入侵誘導的多種促炎介質(zhì)釋放，引起免疫功能失調(diào)。放大的炎癥瀑布效應引起全身炎癥因子釋放失控，最終導致細胞損傷、凋亡和器官功能障礙。目前膿毒癥治療效果不佳而且費用異常昂貴。近20年來，研究人員針對膿毒癥已知的發(fā)病機理嘗試了多種治療方法，如采用單克隆抗體中和腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、白介素1（IL-1）等細胞因子，然而臨床試驗發(fā)現(xiàn)這些生物療法的臨床療效并不理想。目前研究重點已轉(zhuǎn)向?qū)ふ疑嫌握{(diào)控途徑，以期達到從源頭控制體內(nèi)炎癥級聯(lián)反應的目的，尋求膿毒癥新的治療方法。微小RNA（microRNA，miRNA）是一種內(nèi)源性非編碼RNA分子，，由21~25個核苷酸組成。miRNA通常靶向多個信使RNA（mRNA），通過翻譯水平的抑制或斷裂靶標mRNA而調(diào)節(jié)基因的表達。近年來的研究發(fā)現(xiàn)在膿毒癥中，miRNA參與調(diào)控多種致炎基因的表達與抑制，從而影響炎癥細胞的增殖、分化，炎癥因子的產(chǎn)生、釋放和受體的表達。在眾多miRNAs中，研究提示miR-142-3p在膿毒癥模型中變化明顯，可能參與炎癥調(diào)控反應，但具體作用機制尚不明確。 目的 1.明確miR-142-3p在THP-1細胞釋放炎癥因子過程中的作用。 2.為發(fā)現(xiàn)調(diào)控免疫細胞釋放炎癥因子的新途徑提供實驗依據(jù)。 內(nèi)容與方法 1.培養(yǎng)實驗細胞THP-1細胞株并傳代；PI單染色法檢測THP-1細胞存活率。 2.分別以低濃度（0.5μg/ml）及高濃度（2.0μg/ml）LPS誘導THP-1細胞24小時，應用ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6和MCP-1的濃度。 3.在THP-1細胞中轉(zhuǎn)染熒光RNA，通過熒光顯微鏡觀察脂質(zhì)體試劑（Lipofectamine IMAX）的轉(zhuǎn)染效率。在THP-1細胞以100nM濃度轉(zhuǎn)染miR-142-3p模擬物（mimic）和阻遏物（inhibitor），qRT-PCR法檢測miR-142-3p含量。 4.過表達miR-142-3p對炎癥因子釋放的影響：在THP-1細胞轉(zhuǎn)染miR-142-3pmimic（100nM）后培養(yǎng)48小時，ELISA法檢測細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6和MCP-1的濃度。 5.抑制miR-142-3p表達對炎癥因子釋放的影響：(1)在THP-1細胞轉(zhuǎn)染miR-142-3p inhibitor（100nM）后培養(yǎng)48小時；(2)在THP-1細胞轉(zhuǎn)染miR-142-3p inhibitor（100nM）培養(yǎng)24小時后，加入0.5μg/ml及2.0μg/ml LPS誘導24小時，ELISA法檢測以上細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6和MCP-1的濃度。 結(jié)果 1.兩種濃度LPS誘導THP-1細胞后，炎癥因子（TNF-α、IL-6和MCP-1）釋放量均較對照組升高（P＜0.01），并表現(xiàn)出LPS濃度依賴性，高濃度組較低濃度組釋放量增加，有統(tǒng)計學差異（TNF-α：P＜0.01；IL-6、MCP-1：P＜0.05）。 2.在轉(zhuǎn)染100nM miR-142-3p mimic后，THP-1細胞內(nèi)miR-142-3p含量較陰性對照組（NC組）增加（P＜0.05）；轉(zhuǎn)染100nM miR-142-3p inhibitor后，miR-142-3p含量較inhibitor陰性對照組（INC組）下降，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 3.過表達miR-142-3p后，細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6和MCP-1的水平較NC組增加，有統(tǒng)計學差異（TNF-α：P＜0.05；IL-6、MCP-1： P＜0.01）。 4.抑制miR-142-3p的表達后，細胞培養(yǎng)液中TNF-α、IL-6和MCP-1釋放水平相對于INC組無明顯變化（P＞0.05）。 5.抑制miR-142-3p的表達后再以兩種濃度LPS誘導，低濃度組中細胞培養(yǎng)液IL-6釋放量減少（P＜0.05）；高濃度組IL-6釋放量的減少，沒有統(tǒng)計學差異（P＞0.05）。在兩組中，TNF-α、MCP-1釋放量均略減少，但差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。 結(jié)論 1.內(nèi)毒素脂多糖（LPS）能誘導THP-1細胞釋放TNF-α、IL-6和MCP-1。 2.過表達miR-142-3p能促進THP-1細胞釋放TNF-α、IL-6和MCP-1。 3.抑制THP-1細胞miR-142-3p的表達可減少LPS誘導的IL-6釋放。
【關(guān)鍵詞】：脂多糖 膿毒癥 微小RNA 炎癥因子 單核細胞
【學位授予單位】：廣州醫(yī)學院
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2012
【分類號】：R459.7
【目錄】：

• 中英文縮略詞表3-5
• 中文摘要5-8
• ABSTRACT8-12
• 前言12-15
• 材料與方法15-24
• 結(jié)果24-31
• 討論31-36
• 結(jié)論36-37
• 參考文獻37-41
• 綜述41-50
• 參考文獻47-50
• 附表50-51
• 附彩圖51-52
• 致謝52-54

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