本文關(guān)鍵詞：小鼠原代血管平滑肌細(xì)胞改良分離方法的建立

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【摘要】：目的:建立方便、快速、高效的小鼠原代血管平滑肌細(xì)胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)的分離培養(yǎng)方法,為相關(guān)研究提供快速獲取原代VSMC的方法技術(shù)。方法:分離小鼠主動(dòng)脈,用Ⅰ型膠原酶消化血管組織去除內(nèi)皮細(xì)胞等雜細(xì)胞;將血管切成1mm2大小組織塊種植于六孔細(xì)胞培養(yǎng)板孔底,用分離培養(yǎng)液誘導(dǎo)原代VSMC細(xì)胞的繁殖生長(zhǎng)。光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài)特征;免疫組化方法鑒定VSMC特異性蛋白α-SMA的表達(dá);RT-PCR方法檢測(cè)VSMC特異性蛋白α-SMA和SM22α的mRNA表達(dá)水平。結(jié)果:本方法分離原代VSMC,3d后可見(jiàn)長(zhǎng)梭狀VSMC從組織塊邊緣長(zhǎng)出,7d后可以進(jìn)行傳代。光學(xué)顯微鏡觀察顯示,分離細(xì)胞具有平滑肌細(xì)胞(smooth muscle cell,SMC)形態(tài)特征;免疫組化分析顯示,分離細(xì)胞α-SMA蛋白表達(dá)陽(yáng)性;RT-PCR分析顯示,分離細(xì)胞中α-SMA和SM22α在mRNA水平高表達(dá)。結(jié)論:本實(shí)驗(yàn)成功建立了一種簡(jiǎn)便、快捷、高效從組織塊分離培養(yǎng)VSMC的改良方法,為快速獲得原代VSMC提供了一種適用的方法技術(shù)。
【作者單位】： 川北醫(yī)學(xué)院生化教研室;川北醫(yī)學(xué)院藥理教研室;
【關(guān)鍵詞】： 小鼠動(dòng)脈血管 血管平滑肌細(xì)胞 組織塊培養(yǎng)方法 原代細(xì)胞培養(yǎng)
【基金】：四川省科技廳應(yīng)用基礎(chǔ)項(xiàng)目(2006J13-031)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 血管鈣化(vascular calcification)是鈣磷在血管壁的異常沉積導(dǎo)致的異位鈣鹽沉積現(xiàn)象,與高血壓、動(dòng)脈粥樣硬化性病變、糖尿病及終末期腎病、衰老等疾病的發(fā)生密切相關(guān)[1]。許多研究表明,血管鈣化過(guò)程是與成骨過(guò)程類似的細(xì)胞主動(dòng)性可調(diào)節(jié)過(guò)程。在這一過(guò)程中,VSMC被轉(zhuǎn)化為成骨樣

【參考文獻(xiàn)】

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3 戴e

本文編號(hào)：1116815