本文關(guān)鍵詞：弓形蟲微線體蛋白MIC2和M2AP真核表達(dá)載體的構(gòu)建

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【摘要】：目的構(gòu)建弓形蟲RH株微線體蛋白M2AP和MIC2的真核表達(dá)載pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,為建立同時(shí)表達(dá)MIC2和M2AP蛋白的重組畢赤酵母表達(dá)系統(tǒng),制備重組粘附蛋白復(fù)合體MIC2-M2AP奠定基礎(chǔ)。方法提取弓形蟲RH株速殖子總RNA,用Oligo dT-Adaptor引物逆轉(zhuǎn)錄合成cDNA。根據(jù)已知的弓形蟲mic2和m2ap基因序列,采用引物設(shè)計(jì)軟件Primer premier5.0自行設(shè)計(jì)并合成引物,以cDNA為模板,PCR擴(kuò)增mic2和m2ap基因,克隆入pMD-19-simple-T載體,經(jīng)酶切和測(cè)序鑒定后回收目的片段,分別插入至pGAPZαA內(nèi),構(gòu)建重組畢赤酵母表達(dá)載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,轉(zhuǎn)化入E.coli DH5α。提取轉(zhuǎn)化菌質(zhì)粒,進(jìn)行酶切和測(cè)序鑒定。結(jié)果 PCR擴(kuò)增得到的mic2和m2ap基因分別為2 200bp和1 000bp,與預(yù)期大小一致。T-A克隆重組質(zhì)粒pMD19-T-mic2、pMD19-T-m2ap和重組酵母表達(dá)質(zhì)粒pGAPZαA-mic2、pGAPZαA-m2ap經(jīng)測(cè)序鑒定,與GenBank收錄的弓形蟲mic2基因和m2ap基因序列同源性為100%,重組畢赤酵母表達(dá)載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap構(gòu)建成功。結(jié)論成功構(gòu)建弓形蟲重組畢赤酵母表達(dá)載體pGAPZαA-mic2和pGAPZαA-m2ap,為進(jìn)一步研究MIC2和M2AP相互作用機(jī)制及其免疫保護(hù)效應(yīng)奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 溫州醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院寄生蟲學(xué)教研室;
【關(guān)鍵詞】： 剛地弓形蟲 MIC MAP 真核表達(dá)
【基金】：浙江省自然科學(xué)基金項(xiàng)目(No.Y2100971) 浙江省大學(xué)生科技創(chuàng)新活動(dòng)計(jì)劃項(xiàng)目(No.2013R413013) 溫州醫(yī)科大學(xué)本專科學(xué)生科研課題項(xiàng)目(No.wyx201201026)
【分類號(hào)】：R382.5
【正文快照】： 剛地弓形蟲(Toxoplasma gondii)是一種專性細(xì)胞內(nèi)寄生蟲,可寄生于包括人類在內(nèi)的哺乳動(dòng)物、爬行類和鳥類的所有有核細(xì)胞中,引起人獸共患弓形蟲病。人感染弓形蟲后多為隱性感染,但免疫缺陷病人及孕婦感染弓形蟲后危害嚴(yán)重。目前治療弓形蟲病的藥物療效不理想,而弓形蟲疫苗接種

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本文編號(hào)：1116200