本文關(guān)鍵詞：sox9和LMP1基因慢病毒載體共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后的表達(dá)

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【摘要】：背景:與傳統(tǒng)細(xì)胞因子誘導(dǎo)液誘導(dǎo)的方法相比,將基因通過慢病毒轉(zhuǎn)染入宿主細(xì)胞,可以得到長期高效的持續(xù)表達(dá),采取雙/多基因共修飾治療的策略,較采用單一的因子來誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向類髓核細(xì)胞方向轉(zhuǎn)化可獲得更好的效果。目的:構(gòu)建sox9基因慢病毒載體以及LMP1基因慢病毒載體,并共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察SOX9和LMP1基因的表達(dá)情況。方法:雙酶切從Gene Art提供的含sox9基因序列的質(zhì)粒13ABIV6C_1366933并克隆到p Lenti6.3_MCS_IRES2-EGFP載體,獲得含sox9基因的質(zhì)粒p LMIG-13GS0345-1。通過單鏈oligo設(shè)計(jì)及合成LMP1基因序列,并克隆到p Lenti6.3_MCS_IRES2-Ds Red-Monomer載體,獲得含LMP1基因的質(zhì)粒13GS0318-1。再通過293T細(xì)胞包裝后獲得綠色熒光蛋白標(biāo)記的sox9基因慢病毒載體(Lenti-SOX9-GFP),以及紅色熒光蛋白的LMP1基因慢病毒載體(Lenti-LMP1-RFP)。將Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞,觀察sox9基因及LMP1基因的表達(dá)情況。結(jié)果與結(jié)論:測序結(jié)果顯示質(zhì)粒p LMIG-13GS0345-1和13GS0318-1中的插入序列與基因庫中sox9(NM_000346)及LMP1(AF345904.1)基因序列完全一致,成功構(gòu)建Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP慢病毒載體。Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP共轉(zhuǎn)染兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞后同一視野下可觀察到綠色和紅色熒光蛋白的共表達(dá),RT-PCR與Western Blot檢測結(jié)果證明Lenti-SOX9-GFP和Lenti-LMP1-RFP可成功高效共轉(zhuǎn)染目的細(xì)胞并可在m RNA及蛋白水平同時(shí)表達(dá)SOX9及LMP1。結(jié)果說明實(shí)驗(yàn)成功構(gòu)建了綠色熒光蛋白標(biāo)記的攜帶sox9基因的Lenti-SOX9-GFP慢病毒載體,以及紅色熒光蛋白的攜帶LMP1基因的Lenti-LMP1-RFP慢病毒載體,為sox9和LMP1基因共修飾組織工程髓核的研究提供前期實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍第113醫(yī)院骨科;解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)附屬長海醫(yī)院胸心外科實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 干細(xì)胞 間質(zhì)干細(xì)胞 慢病毒感染 sox轉(zhuǎn)錄因子 骨髓干細(xì)胞 慢病毒 sox基因 LMP基因 椎間盤 髓核細(xì)胞 共轉(zhuǎn)染 組織工程
【基金】：南京軍區(qū)醫(yī)學(xué)科技創(chuàng)新重點(diǎn)課題(12Z06),課題名稱:LMP-1和SOX9共修飾BMSCs后復(fù)合血小板凝膠生物支架構(gòu)建組織工程髓核的實(shí)驗(yàn)研究~~
【分類號】：R3416
【正文快照】： 0引言Introduction在體內(nèi),髓核組織修復(fù)和再生涉及復(fù)雜的信號調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及多種細(xì)胞因子的共同參與,研究表明sox9和LMP1基因在髓核組織修復(fù)和再生過程中具有重要的作用。調(diào)節(jié)Ⅱ型膠原合成的性別決定區(qū)Y-Box(sex determining regionY-Box9,sox-9)在髓核退變中越來越受到人們的關(guān)注

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1 蘇玲，滕智平，趙全壁，，曾毅;高分化及低分化鼻咽癌細(xì)胞株中Epstein－Barr病毒潛伏感染膜蛋白（LMP1）基因的原位雜交與克隆及序列分析[J];病毒學(xué)報(bào);1995年02期

2 楊成勇,蔡偉民,沈倍奮,曾毅;鼻咽癌患者EB病毒潛伏膜蛋白(LMP1)的特異性細(xì)胞免疫研究[J];病毒學(xué)報(bào);1999年03期

3 張志偉;張瓊;余艷輝;歐陽詠梅;賀智敏;;LMP1羧基末端第三活性區(qū)對鼻咽上皮細(xì)胞生物學(xué)特性的影響[J];南華大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2009年06期

4 湯敏中,鄭裕明,郭秀嬋,張永利,曾毅;鼻咽癌患者EBV LMP1基因C端區(qū)的缺失突變及序列分析[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2003年01期

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中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 趙莎;結(jié)外鼻型NK/T細(xì)胞淋巴瘤腫瘤組織和裸鼠移植瘤模型中LMP1的檢測及其致瘤機(jī)制的探討[D];四川大學(xué);2005年

本文編號：1110889