本文關(guān)鍵詞：丙烯醛單克隆抗體的制備及ELISA方法的建立

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【摘要】：目的利用丙烯醛陽(yáng)性雜交瘤細(xì)胞株制備腹水型單克隆抗體,優(yōu)化并建立丙烯醛的ELISA檢測(cè)技術(shù)。方法采用直接人工合成法,將丙烯醛半抗原與載體耦合制備完全抗原(免疫原)。利用PEG法將免疫效價(jià)高的Balb/c小鼠的脾臟細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合,采用有限稀釋法進(jìn)行4次亞克隆,篩選得到1株能穩(wěn)定分泌抗丙烯醛抗體的亞型為IgG2b的雜交瘤細(xì)胞株1G7G6,并制備腹水型抗體。在此基礎(chǔ)上,優(yōu)化并建立檢測(cè)丙烯醛的間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA方法。結(jié)果合成適于免疫和ELISA檢測(cè)的完全抗原丙烯醛-KLH(免疫原)和丙烯醛-BSA(包被原),制備的丙烯醛抗體(腹水)的效價(jià)均在8×104以上,與其他丙烯醛類(lèi)似物交叉反應(yīng)率均小于1%,特異性高。優(yōu)化后丙烯醛ELISA方法的檢測(cè)靈敏度(IC50)為43.2 ng/ml,檢測(cè)線性范圍為4.4~417.2 ng/ml,檢測(cè)限(LOD)為1.8 ng/ml。結(jié)論成功制備得到高親和力、高效價(jià)的丙烯醛腹水型單抗,篩選優(yōu)化了間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA檢測(cè)條件,建立了檢測(cè)液相中丙烯醛的特異、快速、靈敏的ELISA檢測(cè)技術(shù)。
【作者單位】： 暨南大學(xué)生物工程學(xué)系
【關(guān)鍵詞】： 丙烯醛 完全抗原 單克隆抗體 間接競(jìng)爭(zhēng)ELISA
【基金】：暨南大學(xué)自然科學(xué)基金(109057,640073)
【分類(lèi)號(hào)】：R392.11
【正文快照】： 丙烯醛(Acrolein)為無(wú)色透明液體,易溶于水、乙醇等極性溶劑,具有很強(qiáng)的刺激性和催淚性。其分子結(jié)構(gòu)中有C=C、HC=O 2個(gè)活性基團(tuán),可發(fā)生加合、氧化、還原及聚合反應(yīng)等。丙烯醛屬高毒性有機(jī)污染物,人類(lèi)通過(guò)不同的途徑接觸丙烯醛,如食物(葡萄酒、啤酒、地溝油、醬油等)、燃燒物(

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4 陳t，

本文編號(hào)：1109203