本文關(guān)鍵詞：中東呼吸綜合征冠狀病毒假病毒系統(tǒng)的建立及其在中和抗體檢測(cè)中的應(yīng)用

  更多相關(guān)文章： 中東呼吸綜合征冠狀病毒 S蛋白 假病毒 中和試驗(yàn)

【摘要】：目的:為了避免中東呼吸綜合征冠狀病毒(MERS-CoV)感染與中和試驗(yàn)中操作活病毒帶來的生物安全隱患,構(gòu)建只具有一次感染能力而無復(fù)制能力的MERS假病毒,建立MERS假病毒系統(tǒng),并應(yīng)用于中和抗體檢測(cè)。方法:構(gòu)建含有MERS-CoV S基因的重組質(zhì)粒pcDNA3.1-MERS-S,與缺失Env基因、含有螢光素酶報(bào)告基因的HIV-1骨架質(zhì)粒pNL4-3.Luc.RE共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收獲含有假病毒的上清;通過Western印跡、細(xì)胞感染實(shí)驗(yàn)和血清中和試驗(yàn),確定是否包裝出MERS假病毒,及是否能有效應(yīng)用于細(xì)胞感染與中和試驗(yàn)。結(jié)果:MERS假病毒pMERS-S培養(yǎng)上清經(jīng)Western印跡鑒定出相對(duì)分子質(zhì)量為25×103的HIV-1 P24蛋白和相對(duì)分子質(zhì)量為180×103的MERS-CoV S蛋白;與陰性對(duì)照假病毒pEnv-相比,pMERS-S能有效感染MERS-CoV敏感細(xì)胞系Huh-7,在感染細(xì)胞中產(chǎn)生熒光信號(hào),感染細(xì)胞的假病毒量與產(chǎn)生的熒光信號(hào)呈明顯的量效關(guān)系;在MERS假病毒中和試驗(yàn)中,pMERS-S能被MERS-CoV中和抗體中和而失去感染力,反映抗體對(duì)MERS-CoV的中和活性。結(jié)論:建立了不依賴于BSL-3高等級(jí)生物安全條件的MERS假病毒系統(tǒng),并有效應(yīng)用于中和抗體檢測(cè),為MERS-CoV疫苗、藥物評(píng)價(jià)及病毒致病機(jī)制研究提供了良好的技術(shù)支撐手段。
【作者單位】： 山西醫(yī)科大學(xué)微生物與免疫學(xué)教研室;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院微生物流行病研究所 病原生物學(xué)國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 中東呼吸綜合征冠狀病毒 S蛋白 假病毒 中和試驗(yàn)
【基金】：國家重點(diǎn)基礎(chǔ)研究發(fā)展計(jì)劃(2011CB504706)
【分類號(hào)】：R373.1
【正文快照】： 中東呼吸綜合征冠狀病毒(Middle East respira-tory syndrome coronavirus,MERS-CoV)是一種新型冠狀病毒[1],它可以使感染者出現(xiàn)急性、嚴(yán)重呼吸道疾病,伴有發(fā)熱、咳嗽、氣短及呼吸困難,部分病例出現(xiàn)腎功能衰竭和死亡[2-3],是一種高致病性病毒。活病毒中和試驗(yàn)一直是檢測(cè)血清

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本文編號(hào)：1106019