本文關(guān)鍵詞：全人源scFv-Fc真核表達載體的構(gòu)建與鑒定

  更多相關(guān)文章： scFv-Fc CHO細胞 真核表達 IL-

【摘要】：目的:構(gòu)建全人源抗IL-33 scFv-Fc重組載體,轉(zhuǎn)染中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表達并鑒定融合抗體蛋白。方法:RT-PCR擴增人IgG1 Fc段并插入真核表達載體pcDNA3.1中,構(gòu)建pcDNA3.1/Fc重組載體;將合成的信號肽(SP)序列插入重組質(zhì)粒pcDNA3.1/Fc,構(gòu)建重組pcDNA3.1/SP-Fc通用載體;最后將本實驗室前期篩選的抗IL-33 scFv插入重組質(zhì)粒pcDNA3.1/SP-Fc中,構(gòu)建重組pcDNA3.1/SP-scFv-Fc載體,測序正確后轉(zhuǎn)染CHO細胞。RT-PCR、Western blot檢測目的基因的轉(zhuǎn)錄及表達。結(jié)果:重組質(zhì)粒測序結(jié)果表明成功地構(gòu)建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達載體,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小為1 560 bp左右。轉(zhuǎn)染CHO細胞后,RT-PCR結(jié)果顯示目的基因在CHO細胞中成功轉(zhuǎn)錄,Western blot顯示表達的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清發(fā)生特異性免疫反應(yīng)。結(jié)論:成功構(gòu)建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達載體,以便于后續(xù)在CHO細胞中表達。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院;
【關(guān)鍵詞】： scFv-Fc CHO細胞 真核表達 IL-
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 瀘州市科技局項目(13ZB0262)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： IL-33是IL-1家族的新成員,廣泛表達于多種組織,高表達于胃、肺、脊髓、腦和皮膚,參與宿主防御、免疫調(diào)節(jié)與炎癥反應(yīng)[1]。IL-33可誘導(dǎo)表達IL-4、IL-5以及IL-13從而在黏膜組織中引起嚴重的病理改變。本實驗室前期通過噬菌體展示技術(shù)篩選了全人源抗IL-33的單鏈抗體(single-chain

【參考文獻】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 王e，

本文編號：1094682