本文關鍵詞：全人源scFv-Fc真核表達載體的構建與鑒定

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【摘要】：目的:構建全人源抗IL-33 scFv-Fc重組載體,轉染中國倉鼠卵巢細胞(Chinese hamster ovary cells,CHO),表達并鑒定融合抗體蛋白。方法:RT-PCR擴增人IgG1 Fc段并插入真核表達載體pcDNA3.1中,構建pcDNA3.1/Fc重組載體;將合成的信號肽(SP)序列插入重組質粒pcDNA3.1/Fc,構建重組pcDNA3.1/SP-Fc通用載體;最后將本實驗室前期篩選的抗IL-33 scFv插入重組質粒pcDNA3.1/SP-Fc中,構建重組pcDNA3.1/SP-scFv-Fc載體,測序正確后轉染CHO細胞。RT-PCR、Western blot檢測目的基因的轉錄及表達。結果:重組質粒測序結果表明成功地構建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達載體,插入的SP-scFv-Fc目的基因大小為1 560 bp左右。轉染CHO細胞后,RT-PCR結果顯示目的基因在CHO細胞中成功轉錄,Western blot顯示表達的蛋白可以和羊抗人IgG1 Fc抗血清發(fā)生特異性免疫反應。結論:成功構建了pcDNA3.1/SP-scFv-Fc重組真核表達載體,以便于后續(xù)在CHO細胞中表達。
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學院基礎醫(yī)學院;
【關鍵詞】： scFv-Fc CHO細胞 真核表達 IL-
【基金】：國家自然科學基金(31000415) 四川省青年基金(2012JQ0018) 瀘州市科技局項目(13ZB0262)
【分類號】：R392.11
【正文快照】： IL-33是IL-1家族的新成員,廣泛表達于多種組織,高表達于胃、肺、脊髓、腦和皮膚,參與宿主防御、免疫調節(jié)與炎癥反應[1]。IL-33可誘導表達IL-4、IL-5以及IL-13從而在黏膜組織中引起嚴重的病理改變。本實驗室前期通過噬菌體展示技術篩選了全人源抗IL-33的單鏈抗體(single-chain

【參考文獻】

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1 王e，

本文編號：1094682