發(fā)布時(shí)間：2017-10-25 07:19

  本文關(guān)鍵詞：人源性抗前列腺特異性膜抗原單鏈抗體的基因構(gòu)建、表達(dá)及鑒定

  更多相關(guān)文章： 前列腺特異性膜抗原 單鏈抗體 融合蛋白 靶向輸送

【摘要】：目的:分別構(gòu)建人源性抗前列腺特異性膜抗原(PSMA)單鏈抗體(sc Fv)/魚(yú)精蛋白截短體(tp)、sc Fv/弗林蛋白酶識(shí)別位點(diǎn)(Fdt)/流感病毒融合肽結(jié)構(gòu)域(HA2)/tp融合蛋白基因。利用原核表達(dá)體系表達(dá)、純化并檢測(cè)sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp融合蛋白的活性。方法:采用PCR的方法,擴(kuò)增融合基因sc Fv、sc Fv-tp、sc Fv-Fdt-HA2-tp,將獲得的基因克隆入原核表達(dá)載體p ET28,在大腸桿菌BL21中表達(dá),表達(dá)產(chǎn)物經(jīng)SDS-PAGE和Western印跡鑒定,通過(guò)Ni2+-NTA螯合層析純化。ELISA分析融合蛋白抗原親和活性。結(jié)果:成功構(gòu)建了人源性抗PSMA融合基因,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后在M15中以包涵體形式表達(dá)。表達(dá)的目的蛋白均能與PSMA抗原結(jié)合。結(jié)論:融合蛋白具有結(jié)合抗原的活性,為靶向遞送siRNA的研究奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍323醫(yī)院泌尿外科;第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院泌尿外科;西安交通大學(xué)第二附屬醫(yī)院藥劑科;第四軍醫(yī)大學(xué)西京醫(yī)院泌尿外科;第四軍醫(yī)大學(xué)免疫教研室;
【關(guān)鍵詞】： 前列腺特異性膜抗原 單鏈抗體 融合蛋白 靶向輸送
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(30973000)~~
【分類(lèi)號(hào)】：R392.1
【正文快照】： Supported by a grant from National Natural Science Foundation of China(30973000).Correspondence to:SU Yan-sheng,email:suys2006@163.comReceived:March 12,2014;accepted:August 26,2014單鏈抗體(single-chain variable fragment,sc Fv)是將免疫球蛋白的重鏈可變區(qū)(V

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【相似文獻(xiàn)】

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5 吳沁航;王彤;張_";張娟;王e，

本文編號(hào)：1092663