本文關(guān)鍵詞：定點突變阻止金黃色葡萄球菌α-溶血素溶血活性

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【摘要】：金黃色葡萄球菌分泌的α-溶血素是導致肺炎的重要致病因子。為進一步研究金黃色葡萄球菌α-溶血素(α-hla)的分子致病機理以及對其進行免疫預防,對α-hla第35位氨基酸進行了定點突變。用聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù),從S.aureus wood46株基因組中擴增出α-hla基因,再利用重疊延伸PCR技術(shù),將第35位帶正電荷的組氨酸(密碼子為CAC)突變?yōu)榉菢O性的亮氨酸(密碼子為CTC)。hlaH35L基因測序結(jié)果顯示第35位的組氨酸突變?yōu)榱涟彼?構(gòu)建的重組表達質(zhì)粒pET-28a-c(+)/hla和pET-28a-c(+)/hlaH35L在E.coli BL21(DE3)中得到表達,重組蛋白α-Hla及hlaH35L大小均為33.4 kDa,α-Hla引起兔紅細胞溶血,hlaH35L未引起兔紅細胞溶血。成功表達并獲得了失去溶血毒性的重組蛋白hlaH35L。
【作者單位】： 黑龍江八一農(nóng)墾大學動物科技學院;黑龍江八一農(nóng)墾大學生命技術(shù)學院;
【關(guān)鍵詞】： 金黃色葡萄球菌 α-溶血素 定點誘變 原核表達 溶血活性
【基金】：國家自然基金委資助項目(31072120) 黑龍江省農(nóng)墾總局資助項目(HNK11A-08-01-04)
【分類號】：R378
【正文快照】： 金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus,S.aureus)是一種革蘭氏陽性菌,廣泛分布于自然界,常存在于人和動物的體表、鼻咽部及腸道。是引起人類和動物皮膚、關(guān)節(jié)、軟組織等多種感染以及致命性敗血癥和肺炎的主要病原菌之一。S.aureus感染后在體內(nèi)大量增殖,并產(chǎn)生和分泌毒素(如α

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