本文關(guān)鍵詞：人自噬相關(guān)基因LC3B原核表達(dá)載體的構(gòu)建及活性檢測

  更多相關(guān)文章： 人LCB基因 原核表達(dá) 純化 自噬

【摘要】：目的構(gòu)建帶GST標(biāo)簽的人LC3B基因原核表達(dá)載體,得到GST-LC3B重組質(zhì)粒并純化出GST-LC3B融合蛋白,體外檢測并證實該蛋白的生物學(xué)活性。方法利用PCR技術(shù)從人乳腺文庫中擴(kuò)增出LC3B基因的編碼序列,將該序列插入到p GEX-KG載體中,得到GST-LC3B重組質(zhì)粒,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rossate,經(jīng)小量誘導(dǎo)后利用GSTSepharose 4B親和珠純化GST-LC3B融合蛋白,通過SDS-PAGE電泳和Western印跡方法進(jìn)行檢測,GST pull-down技術(shù)證實其生物學(xué)活性。結(jié)果利用PCR技術(shù)從人乳腺文庫中成功擴(kuò)增得到大小約400 bp的目的基因片段,插入p GEX-KG載體中得到GST-LC3B質(zhì)粒,經(jīng)雙酶切鑒定及測序結(jié)果表明重組質(zhì)粒構(gòu)建成功;轉(zhuǎn)化Rossate菌并小量誘導(dǎo),表達(dá)鑒定成功后純化得到相對分子質(zhì)量(Mr)約為40×103的目的蛋白;GST pull-down技術(shù)檢測出GST-LC3B融合蛋白可以和Atg4B蛋白在體外作用,具有較好的生物學(xué)活性。結(jié)論成功構(gòu)建了人自噬相關(guān)基因LC3B的原核表達(dá)產(chǎn)物,為進(jìn)一步研究LC3B在自噬中的作用機(jī)制奠定了基礎(chǔ)。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院第一附屬醫(yī)院;軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院生物工程研究所;
【關(guān)鍵詞】： 人LCB基因 原核表達(dá) 純化 自噬
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(31100604)
【分類號】：R392.12;Q78
【正文快照】： 自噬(autophagy)是真核生物細(xì)胞特有的一種自我降解、自我吞噬的生命現(xiàn)象[1]。自噬的實質(zhì)是細(xì)胞的分解代謝[2],即在營養(yǎng)缺失、低氧或病原體感染等應(yīng)激條件下,細(xì)胞依賴溶酶體對自身的大分子物質(zhì)(如蛋白)、細(xì)胞器(如線粒體)等進(jìn)行降解,以提供細(xì)胞生存代謝所需的能量和營養(yǎng)物質(zhì)。

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前1條

1 李玲;徐小潔;葉棋濃;;細(xì)胞自噬與腫瘤[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年11期

【共引文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 陳蘭芳;肖亮;楊軍平;;細(xì)胞自噬的分子機(jī)制及其功能[J];實驗與檢驗醫(yī)學(xué);2014年02期

2 彭濤;周緒紅;胡敏;吳婷婷;;miRNA-204在鼻咽癌中的表達(dá)及臨床意義[J];臨床耳鼻咽喉頭頸外科雜志;2014年22期

3 李玲;徐小潔;葉棋濃;;細(xì)胞自噬與腫瘤[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2013年11期

4 張海亮;唐圣松;;細(xì)胞自噬與腫瘤耐藥[J];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)報;2014年03期

5 張慧卿;方念;蘆珊;何波;萬以葉;;氯喹促進(jìn)順鉑誘導(dǎo)胃癌SGC7901細(xì)胞凋亡及其機(jī)制[J];中國腫瘤臨床;2013年16期

6 張武德;程衛(wèi)東;鮑英存;趙敏;趙建雄;;扶正抑瘤湯誘導(dǎo)肝癌HepG2細(xì)胞凋亡及自噬作用研究[J];中藥藥理與臨床;2013年05期

7 朱家橋;王玲玲;程來洋;王棋文;王亨;劉學(xué)忠;劉宗平;;鎘對體外培養(yǎng)大鼠肝細(xì)胞自噬的影響[J];中國獸醫(yī)學(xué)報;2013年12期

8 Sumadi Lukman Anwar;Ulrich Lehmann;;DNA methylation,microRNAs,and their crosstalk as potential biomarkers in hepatocellular carcinoma[J];World Journal of Gastroenterology;2014年24期

9 Verena Stiegelbauer;Samantha Perakis;Alexander Deutsch;Hui Ling;Armin Gerger;Martin Pichler;;MicroRNAs as novel predictive biomarkers and therapeutic targets in colorectal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2014年33期

10 劉謀澤;李浩;張偉;;肝內(nèi)膽管癌病理機(jī)制表觀基因組學(xué)研究進(jìn)展[J];中國臨床藥理學(xué)與治療學(xué);2014年11期

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前9條

1 楊景文;5-Fu誘導(dǎo)人結(jié)腸癌HCT-116細(xì)胞自噬與凋亡的關(guān)系及機(jī)制研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2013年

2 楊守梅;miR-21在胃癌細(xì)胞化療耐藥中的作用及其機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

3 李文娟;NOR1是調(diào)節(jié)腫瘤細(xì)胞自噬/凋亡分子開關(guān)的氧化應(yīng)激反應(yīng)性蛋白[D];中南大學(xué);2013年

4 王筱冰;低強(qiáng)度聚焦超聲結(jié)合原卟啉IX誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞不同死亡模式及其機(jī)制研究[D];陜西師范大學(xué);2010年

5 虞俊波;miR-9、let-7b和let-7g調(diào)控Cthrc1基因影響胃癌增殖轉(zhuǎn)移的實驗研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

6 賈彩鳳;REGγ調(diào)控脂質(zhì)代謝的研究[D];華東師范大學(xué);2014年

7 韓惠慧;Alfy對肌萎縮側(cè)索硬化相關(guān)蛋白的影響及作用機(jī)制研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2014年

8 夏水秀;HIF-1α/BNIP3/Beclin-1信號通路介導(dǎo)的自噬與孕期缺氧胎鼠腎發(fā)育障礙的機(jī)制研究[D];蘇州大學(xué);2014年

9 馬克學(xué);持久饑餓對日本三角渦蟲細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)、生化代謝和基因表達(dá)的影響[D];河南師范大學(xué);2014年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 譚俊玲;小鼠生精細(xì)胞與支持細(xì)胞自噬與自噬誘因的初步研究[D];山東大學(xué);2013年

2 鄭懿;丙戊酸誘導(dǎo)前列腺癌細(xì)胞自噬的相關(guān)機(jī)制研究[D];山東大學(xué);2013年

3 楊偉;TPM1在膽管癌中的表達(dá)及其調(diào)控機(jī)制研究[D];南京醫(yī)科大學(xué);2013年

4 張潔;鯊魚肝臟中與肝再生相關(guān)的microRNAs研究[D];浙江理工大學(xué);2013年

5 陳煥雄;先天性肌性斜頸鈣蛋白酶-1、泛素和20S蛋白酶體表達(dá)[D];遵義醫(yī)學(xué)院;2013年

6 李媛媛;奧沙利鉑誘導(dǎo)人肝癌細(xì)胞株自噬潮的增加及其對細(xì)胞活力的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2013年

7 賀麗;自噬在TOCP誘發(fā)成年母雞遲發(fā)性神經(jīng)毒性中的作用探討[D];南華大學(xué);2013年

8 趙明明;機(jī)械性神經(jīng)元損傷后自噬的功能及Homer1a通過PI3K/Akt通路對其調(diào)節(jié)作用[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2013年

9 吳紅明;小鼠酒精性心肌病相關(guān)microRNA表達(dá)譜分析[D];昆明醫(yī)科大學(xué);2013年

10 周璐璐;miRNA let-7a在肝內(nèi)膽管癌組織中的表達(dá)及其對膽管癌細(xì)胞生物學(xué)行為影響的實驗研究[D];南華大學(xué);2013年

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 劉碩;黃鐘;羅新萍;劉志剛;陳思;;家蠶蠶蛹過敏原幾丁質(zhì)酶基因的克隆和原核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];熱帶醫(yī)學(xué)雜志;2010年05期

2 楊樹國;王雅靜;朱曉燕;帖超男;廖琳;;陰道毛滴蟲黏附蛋白33基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];四川動物;2008年06期

3 巴彩鳳;聶茹;;pGEX-4T-1-cMC4R原核表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];安徽農(nóng)業(yè)科學(xué);2008年23期

4 耿梅;陳清;徐麗慧;張延亭;何賢輝;;人白細(xì)胞介素7重組蛋白原核表達(dá)載體在大腸桿菌中的表達(dá)和鑒定[J];暨南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)與醫(yī)學(xué)版);2010年04期

5 劉芳;黨國全;;融合毒素TOP_3表達(dá)載體的構(gòu)建[J];青海醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2010年03期

6 劉成倩;王靜;李紅;于宗幸;易建中;陳磊;;雞干擾素-α基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及高效表達(dá)[J];中國畜牧獸醫(yī);2014年04期

7 劉華偉;張宏;孫超;王慶賀;宋艷瑞;;增強(qiáng)型綠色熒光蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)[J];西北農(nóng)業(yè)學(xué)報;2012年02期

8 任圣俊,蔣惠秋,顧健人;大腸桿菌胞嘧啶脫氨酶基因克隆及其原核表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)[J];科學(xué)通報;1997年19期

9 李德玲;張前軍;顧巍;;胰島素前體基因克隆及其原核表達(dá)載體的構(gòu)建[J];汕頭大學(xué)醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2014年01期

10 劉占通;崔保安;舒暢;金喜新;陳紅英;楊明凡;魏戰(zhàn)勇;;豬α干擾素原核表達(dá)載體的構(gòu)建及表達(dá)[J];河南農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2006年04期

中國重要會議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 鄔玉蘭;劉志剛;;牛奶主要過敏原β-乳球蛋白基因的克隆及其原核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會2009年全國變態(tài)反應(yīng)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

2 劉全華;華麗;霍婧;鮑一笑;;人白介素13原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的表達(dá)[A];第六屆江浙滬兒科學(xué)術(shù)會議暨兒科學(xué)基礎(chǔ)與臨床研究進(jìn)展學(xué)術(shù)班論文匯編[C];2009年

3 劉林林;王鐵君;楊艷明;蘇清秀;殷勝松;張奇;龔守良;;小鼠分泌型內(nèi)皮抑素原核表達(dá)載體pNZ44-ssEndostatin的構(gòu)建及表達(dá)[A];中華醫(yī)學(xué)會放射腫瘤治療學(xué)分會六屆二次暨中國抗癌協(xié)會腫瘤放療專業(yè)委員會二屆二次學(xué)術(shù)會議論文集[C];2009年

4 楊海杰;管寶全;羅文新;李少偉;鮮陽凌;張軍;夏寧邵;;含分泌信號的原核表達(dá)載體的組建及應(yīng)用[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

5 彭旭;袁順宗;王曉娟;甘成軍;王慶紅;陳烯偉;張小容;胡曉紅;羅高興;吳軍;;人HT036蛋白的原核表達(dá)及鑒定[A];第八屆全國燒傷外科學(xué)年會論文匯編[C];2007年

6 李慎濤;歐陽紅生;張玉靜;張銳;廖曉萍;孫博興;張永亮;;豬肌生成抑制素基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（上冊）[C];2001年

7 李慎濤;歐陽紅生;張玉靜;張銳;廖曉萍;孫博興;張永亮;;豬肌生成抑制素基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其表達(dá)[A];中國生物化學(xué)與分子生物學(xué)會第八屆會員代表大會暨全國學(xué)術(shù)會議論文摘要集[C];2001年

8 徐海燕;徐志偉;;人胰島素樣生長因子-1的原核表達(dá)載體的構(gòu)建[A];山東免疫學(xué)會、山東微生物學(xué)會醫(yī)學(xué)微生物學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)學(xué)會微生物學(xué)和免疫學(xué)專業(yè)委員會、山東省醫(yī)藥生物技術(shù)學(xué)會2001年學(xué)術(shù)年會論文匯編[C];2001年

9 李士澤;張艷宇;張玉靜;;凋亡蛋白融合基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建及序列分析[A];動物生理生化學(xué)分會第八次學(xué)術(shù)會議暨全國反芻動物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2004年

10 鮑德明;胡乃中;沈際佳;石海;許建明;;人巨噬細(xì)胞金屬彈力酶催化域基因原核表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定[A];中華醫(yī)學(xué)會第七次全國消化病學(xué)術(shù)會議論文匯編（下冊）[C];2007年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前2條

1 劉芳;1.Keap1和p65蛋白相互作用及其作用機(jī)制研究 2.Mayven不同截短體原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)和純化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2008年

2 王桂武;重組IGFBP-4蛋白的表達(dá)、純化、晶體生長及其對鹿茸細(xì)胞增殖抑制的研究[D];中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院;2008年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 楊震;人組織型纖溶酶原激活劑原核表達(dá)載體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的初步表達(dá)[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

2 李曉華;重組梅花鹿胸腺素β_4原核表達(dá)載體的構(gòu)建及活性研究[D];長春中醫(yī)藥大學(xué);2013年

3 范海鳴;大鼠寡霉素敏感相關(guān)蛋白的克隆及原核表達(dá)載體的構(gòu)建[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

4 王喜;重組人糖皮質(zhì)激素受體原核表達(dá)載體的構(gòu)建和表達(dá)[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2005年

5 徐珍珍;人膠原蛋白原核表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的表達(dá)[D];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

6 詹輝;改良型TAT-PTD-VP3融合蛋白的基因合成、原核表達(dá)載體構(gòu)建及原核表達(dá)的實驗研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2006年

7 張云龍;一種蛋白內(nèi)含子介導(dǎo)純化的原核表達(dá)載體的構(gòu)建及應(yīng)用[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

8 畢城偉;Kringle5基因克隆、原核表達(dá)載體構(gòu)建和蛋白表達(dá)的實驗研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2009年

9 張啟波;凋亡素原核表達(dá)載體構(gòu)建、表達(dá)、純化及鑒定的實驗研究[D];昆明醫(yī)學(xué)院;2011年

10 鐘立武;NT3原核表達(dá)載體的構(gòu)建、表達(dá)及精原干細(xì)胞法制備轉(zhuǎn)基因小鼠的實驗研究[D];四川大學(xué);2004年

，

本文編號：1070234