本文關(guān)鍵詞：人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)為肝臟樣細(xì)胞的試驗(yàn)研究

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【摘要】：目的探討人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離、培養(yǎng)、鑒定及向肝臟樣細(xì)胞分化的方法。方法采用膠原酶Ⅰ消化離心法獲得人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞(human adipose-derived mesenchymal stem cells,hADSCs),原代培養(yǎng)并采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)干細(xì)胞相關(guān)表面抗原白細(xì)胞分化抗原13(Cluster differentiation13,CD13)、CD73、CD34、CD45和人類白細(xì)胞DR抗原(human leukocyte antigen DR,HLA-DR)的表達(dá),采用誘導(dǎo)培養(yǎng)基將hADSCs向成脂及成骨方向誘導(dǎo)。采用兩階段細(xì)胞因子誘導(dǎo)法誘導(dǎo)hADSCs,并觀察其形態(tài)變化;采用實(shí)時(shí)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time polymerase chain reaction,RT-PCR)法及細(xì)胞免疫組化法檢測(cè)肝細(xì)胞相關(guān)基因甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)、細(xì)胞角蛋白18抗體(cytokeratin18,CK18)、細(xì)胞角蛋白19抗體(cytokeratin19,CK19)等在肝臟樣細(xì)胞中的表達(dá);采用糖元染色法(Periodic acid-Schiff stain,PAS)檢測(cè)肝臟樣細(xì)胞糖原合成情況。結(jié)果用消化離心法獲取的hADSCs大小均勻,呈梭形的成纖維細(xì)胞樣,體外能長(zhǎng)期培養(yǎng)存活,并保持不分化狀態(tài);流式細(xì)胞儀檢測(cè)顯示hADSCs高表達(dá)CD13、CD73,低表達(dá)CD34、CD45及HLA-DR;hADSCs體外可被誘導(dǎo)成脂肪細(xì)胞及成骨細(xì)胞。hADSCs經(jīng)成肝誘導(dǎo)后,細(xì)胞形態(tài)由梭形變?yōu)槎嘟切蔚母闻K樣細(xì)胞,這些肝臟樣細(xì)胞高表達(dá)血清白蛋白(serum albumin,ALB)、AFP、CY3P4等基因,并表達(dá)肝細(xì)胞相關(guān)性蛋白HepPar-1、AFP、CK18、CK19。PAS染色顯示肝臟樣細(xì)胞胞質(zhì)呈紅色表現(xiàn)。結(jié)論利用消化離心法在體外成功構(gòu)建了人原代脂肪干細(xì)胞系,可長(zhǎng)期存活,反復(fù)傳代,經(jīng)誘導(dǎo)后可轉(zhuǎn)化為有功能的肝臟樣細(xì)胞,為脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞作為生物人工肝及肝組織工程的種子細(xì)胞提供理論依據(jù)。
【作者單位】： 解放軍總醫(yī)院南樓臨床部消化內(nèi)科;解放軍總醫(yī)院輸血科干細(xì)胞實(shí)驗(yàn)室;
【關(guān)鍵詞】： 人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞 分離 鑒定 誘導(dǎo) 肝臟樣細(xì)胞
【基金】：北京市科技新星計(jì)劃基金資助項(xiàng)目(ZXKTYANLI001)~~
【分類號(hào)】：R329
【正文快照】： 我國(guó)是一個(gè)乙型肝炎大國(guó),肝炎病毒攜帶率高達(dá)10%[1];隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展和生活方式的改變,大量飲酒所致的酒精性肝病呈逐年上升趨勢(shì);近年來保健、減肥藥物的使用以及藥物的濫用,藥物性肝病逐年上升;隨著環(huán)境污染的加重,自身免疫性肝病、遺傳性肝病也呈逐年上升趨勢(shì)。這些數(shù)目巨大的

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【相似文獻(xiàn)】

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5 馬云鵬;應(yīng)用大塊平鋪法對(duì)人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞分離、傳代、凍存及復(fù)蘇的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2013年

6 那仁格日勒;溶血磷脂酸抑制人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞凋亡及其分子機(jī)理[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2013年

7 王黎明;臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞的分泌蛋白表達(dá)譜研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 唐秋靈;人臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞向男性生殖細(xì)胞分化的研究[D];汕頭大學(xué);2008年

9 徐小霞;人胎盤絨毛層間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的優(yōu)化及生物學(xué)特性的初步分析[D];蘇州大學(xué);2009年

10 王建軍;成人脂肪間充質(zhì)干細(xì)胞體外長(zhǎng)期培養(yǎng)及成骨潛能的實(shí)驗(yàn)研究[D];蘭州大學(xué);2009年

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本文編號(hào)：1067879