本文關鍵詞：一種小鼠睪丸細胞涂片的快速制備方法

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【摘要】：目的建立一種用于免疫熒光實驗的小鼠睪丸細胞涂片的快速制備新方法。方法分別給出生后16、21、28 d和120 d的小鼠腹腔注射秋水仙素,3 h后取睪丸組織剔除白膜,分離曲精小管進行剪碎,加入冷PBS重懸細胞,過濾,并用冷PBS洗滌細胞3次,然后低滲處理,最后經(jīng)多聚甲醛固定后鋪片。對細胞核進行DAPI染色,并以21 d小鼠睪丸涂片為例進行免疫熒光實驗,檢測所制備的細胞涂片的質量。結果所制備的小鼠睪丸細胞涂片經(jīng)DAPI染色,每張細胞涂片均分布大量生殖細胞,背景清晰,根據(jù)細胞核的大小與著色,可初步判斷生殖細胞類型;用不同發(fā)育階段小鼠所制備的睪丸細胞涂片,細胞分布類型有很大差異,其中28 d小鼠制備的睪丸細胞涂片中生殖細胞類型最多;以21 d小鼠睪丸細胞涂片為例進行免疫熒光實驗,紅色和綠色熒光標記的目標蛋白在精母細胞中表達清晰,背景干凈,說明所制備的細胞涂片適合于免疫熒光檢測。結論成功建立了一種快速制備小鼠睪丸細胞涂片的新方法。
【作者單位】： 中南大學湘雅三醫(yī)院藥學部;中南大學藥學院;中南大學湘雅三醫(yī)院醫(yī)學實驗中心;
【關鍵詞】： 小鼠睪丸 細胞涂片 低滲處理 免疫熒光技術 精子發(fā)生
【基金】：國家自然科學基金(81170615) 湖南省科技廳項目(S2010R1040)
【分類號】：R361.2
【正文快照】： 精子發(fā)生障礙是引起男性生殖障礙的一個主要原因[1-2]。精子發(fā)生過程主要包括精原細胞有絲分裂、精母細胞減數(shù)分裂和精子細胞變態(tài)成形3個階段[3],其中,每個階段都有一些睪丸特異性基因發(fā)揮著重要作用,如:精子相關抗原4樣蛋白(sperm-associated antigen 4-like protein,SPAG4L)

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